Microscopia e Métodos de Coloração para Fungos

A microscopia direta e a coloração permitem ao laboratório visualizar elementos fúngicos numa amostra sem esperar pela cultura. Preparações a fresco simples, branqueadores fluorescentes e colorações de tecidos revelam hifas, leveduras e esporos, fornecendo evidências rápidas da presença fúngica e, no tecido, da invasão.

Definition

Os métodos de microscopia e coloração para fungos são as técnicas que tornam as estruturas fúngicas visíveis em amostras clínicas ou secções de tecido, utilizando agentes clarificadores, ligantes fluorescentes da parede celular ou corantes histoquímicos para exibir hifas, leveduras e esporos sob microscopia de luz ou fluorescência.

Scope

Este tópico abrange métodos para visualização de fungos: preparações a fresco com hidróxido de potássio que clarificam as amostras, corantes fluorescentes como o calcoflúor branco que se ligam às paredes celulares fúngicas, e corantes histopatológicos usados em secções de tecido. Abrange também o que a morfologia pode e não pode dizer ao observador sobre a identidade. É uma referência descritiva de método, não um protocolo de diagnóstico ou tratamento.

Core questions

• Estão presentes elementos fúngicos nesta amostra, e que forma morfológica assumem?
• Qual corante demonstra melhor os fungos numa preparação a fresco versus uma secção de tecido?
• Até que ponto a morfologia por si só pode restringir a identidade do fungo?
• A microscopia mostra invasão tecidual em oposição à colonização superficial?

Key concepts

• Preparação a fresco com hidróxido de potássio (KOH)
• Coloração fluorescente com calcoflúor branco
• Coloração com ácido periódico de Schiff (PAS)
• Coloração com metenamina prata de Grocott-Gomori (GMS)
• Hifas, leveduras e pseudohifas
• Invasão tecidual versus colonização
• Limites da identificação morfológica

Mechanisms

Numa preparação de KOH, o hidróxido de potássio dissolve a queratina e outro material do hospedeiro, deixando as paredes fúngicas refráteis visíveis ao microscópio. Branqueadores fluorescentes como o calcoflúor branco ligam-se à quitina e celulose na parede celular fúngica e fluorescem sob luz ultravioleta, delineando nitidamente hifas e leveduras contra um fundo escuro. No tecido, corantes especiais exploram a parede rica em polissacarídeos: o ácido periódico de Schiff realça as paredes fúngicas em magenta, e o metenamina prata de Grocott-Gomori deposita prata para as tornar pretas, permitindo que os fungos sejam vistos dentro das secções e, crucialmente, que sejam julgados como invadindo o tecido. A morfologia, o padrão de ramificação das hifas, a presença de leveduras ou pseudohifas e a septação, restringe o diagnóstico diferencial, mas raramente é específica para a espécie, pelo que a microscopia é combinada com cultura, antígeno ou métodos moleculares para identificação definitiva.

Clinical relevance

A microscopia fornece algumas das evidências mais rápidas de que um fungo está presente e, no tecido, de que está a invadir, o que é central para o reconhecimento da doença fúngica invasiva. Esta entrada explica os métodos e os seus limites interpretativos como material de referência; não instrui sobre a preparação de amostras ou sobre a gestão de pacientes.

Evidence & guidelines

Revisões de histopatologia fúngica documentam os corantes usados para exibir fungos em tecido e as pistas morfológicas, e limites, da identificação de organismos pela aparência. Recomendações de melhores práticas para o diagnóstico de doenças fúngicas graves posicionam a microscopia direta e a coloração fluorescente como métodos rápidos de primeira linha usados em conjunto com cultura e testes moleculares.

History

A microscopia direta está entre os métodos micológicos mais antigos, com preparações a fresco de KOH há muito usadas para demonstrar dermatófitos e outros fungos. Corantes histoquímicos como os métodos de metenamina prata de Grocott-Gomori e ácido periódico de Schiff tornaram-se padrão no século XX para mostrar fungos em tecido, e os branqueadores fluorescentes adicionaram sensibilidade mais tarde, fazendo as paredes celulares brilharem sob luz ultravioleta.

Seminal works

• guarner-2011
• dehoog-2020

Frequently asked questions

A microscopia pode identificar a espécie fúngica exata?

Geralmente não. A microscopia pode mostrar que os fungos estão presentes e sugerir categorias amplas como leveduras ou bolores, mas a identificação precisa da espécie geralmente requer cultura, espectrometria de massa ou sequenciação de DNA.

Por que o calcoflúor branco é útil para ver fungos?

O calcoflúor branco liga-se a componentes da parede celular fúngica e fluoresce sob luz ultravioleta, fazendo com que mesmo hifas e leveduras esparsas se destaquem brilhantemente, o que melhora a detecção em comparação com uma preparação a fresco não corada.