細胞病理学における補助的手法と分子生物学的手法
補助的手法とは、ルーチンのパパニコロウ染色およびロマノフスキー染色標本を検査した後、形態学的診断を洗練させ、腫瘍を分類し、または臨床的に対応可能な変化を検出するために、細胞学的材料に適用される検査室手法である。これらは、形態学のみでは到達できない細胞診の範囲を広げ、微細針吸引検体、体腔液、剥離細胞検体などの少量検体から、免疫表現型、細胞遺伝学的、分子生物学的情報を提供することを可能にする。
Definition
細胞病理学における補助的手法とは、形態学的診断を補完するために、細胞診標本または残存細胞材料に対して実施される補助的な検査室研究であり、免疫表現型、細胞遺伝学的、分子生物学的、および計算手法を含む。
Scope
この分野では、細胞診検体に用いられる主要な補助的手法について読者に解説する。具体的には、タンパク質マーカーに対する免疫細胞化学、染色体および遺伝子レベルの変化を検出するための蛍光in situハイブリダイゼーション、細胞懸濁液の免疫表現型を解析するためのフローサイトメトリー、細胞診材料を用いた分子生物学的検査およびヒトパピローマウイルス検査、ならびに自動画像解析を伴うデジタル病理学である。これは構造的な概要であり、各手法についてはそれぞれのトピックノードで詳細に扱われる。
Sub-topics
Core questions
- 特定の細胞診検体と診断上の疑問に対して、どの補助的手法が適切か？
- 検体調製と固定は、免疫細胞化学、FISH、および分子生物学的結果の妥当性にどのように影響するか？
- 限られた細胞診材料をどのようにトリアージすれば、形態学的研究と補助的研究の両方を維持できるか？
Key concepts
- 検体の適切性とトリアージ
- セルブロックの作製
- 免疫表現型解析
- バリデーションと前解析的要因
- リフレックス検査と補助検査
- 検体節約型ワークフロー
Mechanisms
細胞診検体は、直接塗抹標本、液状化検体、サイトスピン標本、またはセルブロックとして処理できる。選択された調製法によって、どの補助的手法が実行可能かが決まる。免疫細胞化学は標識抗体を用いてタンパク質抗原を局在させ、蛍光in situハイブリダイゼーションは蛍光プローブを用いて特定のDNA配列を可視化し、フローサイトメトリーは懸濁液中の細胞における抗原発現を測定し、分子アッセイは核酸を抽出して解析する。細胞学的材料はしばしば希少であるため、形態学的検査と1つ以上の補助的研究の両方を実施できるように検体をトリアージすることが繰り返されるテーマである。
Clinical relevance
補助的手法は、細胞診検体から得られる情報の範囲を広げ、腫瘍の分類、系統の同定、および形態学的所見と併せて報告されるバイオマーカーの検出を支援する。本参考資料では、そのような情報がどのように生成されるかを説明する。具体的な検査の選択と解釈は臨床検査室の決定事項であり、ここでは個別のアドバイスは行わない。
Evidence & guidelines
専門機関は、これらの手法に関連するバリデーションおよび報告の枠組みを発表しており、これには診断用途における全スライドイメージングのバリデーションに関する米国病理学会のガイドライン（Pantanowitz et al., 2013）が含まれる。微細針吸引検体材料に直接実施される次世代シーケンシング（Qiu et al., 2015）など、手法に特化したエビデンスは、対応するトピックノード内で要約されている。
History
細胞病理学は、パパニコロウ染色に基づいた純粋な形態学的分野として始まった。その後数十年にわたり、免疫細胞化学、次いでin situハイブリダイゼーションおよびフローサイトメトリー、そして最近では核酸ベースの分子検査およびデジタル画像解析が、組織病理学および臨床検査医学から、細胞診で遭遇するより小さく、異なる方法で調製された検体に応用されてきた。
Related topics
Seminal works
- fetsch-abati-2001
- pantanowitz-2013
Frequently asked questions
- なぜ補助的手法は細胞診において特に重要なのか？
- 細胞診検体はしばしば小さく、組織構造を欠くため、免疫表現型または分子生物学的情報を追加する補助的手法は、形態学のみでは提供できない確定的な分類を可能にすることが多い。
- セルブロックとは何か、また補助検査にとってなぜ重要なのか？
- セルブロックは、残存する細胞診材料から作製されるパラフィン包埋標本であり、免疫細胞化学、in situハイブリダイゼーション、および分子抽出に適した切片を提供する。これにより、細胞診検体における補助的研究の重要な実現手段となる。