नमूना स्थिरीकरण और अभिरंजन

स्थिरीकरण और अभिरंजन दो रासायनिक चरण हैं जो जमा किए गए कोशिका विज्ञान के नमूने को एक व्याख्या योग्य स्लाइड में बदल देते हैं। स्थिरीकरण कोशिकाओं को स्थिर करता है और उनकी आंतरिक संरचना को संरक्षित करता है; अभिरंजन फिर रंग और कंट्रास्ट प्रदान करता है जो कोशिका रोगविज्ञानी को नाभिक को कोशिका द्रव्य से अलग करने और क्रोमेटिन विवरण पढ़ने में मदद करता है। स्थिरीकरण विधि का दाग के साथ युग्मन एक जानबूझकर चुनाव है जो निर्धारित करता है कि कौन सी कोशिकीय विशेषताओं पर जोर दिया जाता है।

Definition

नमूना स्थिरीकरण और अभिरंजन प्रारंभिक चरण हैं जो कोशिकीय आकृति विज्ञान (स्थिरीकरण) को संरक्षित करते हैं और कोशिकीय घटकों (अभिरंजन) को चयनात्मक रंग प्रदान करते हैं ताकि एक कोशिका विज्ञान स्लाइड को माइक्रोस्कोप के तहत पढ़ा जा सके।

Scope

यह प्रविष्टि बताती है कि कोशिका विज्ञान के नमूनों को क्यों और कैसे स्थिर किया जाता है (गीला स्थिरीकरण बनाम जानबूझकर हवा में सुखाना), मुख्य कोशिका विज्ञान के दागों के सिद्धांत, और स्थिरीकरण-दाग संयोजन को नैदानिक प्रश्न से कैसे मिलाया जाता है। यह एक विधि-स्तर का संदर्भ है और इसमें रोगी-विशिष्ट निर्देश नहीं दिए गए हैं।

Key concepts

• स्कंदनकारी अल्कोहल स्थिरीकरण और गीला स्थिरीकरण
• एक प्रारंभिक अवस्था के रूप में जानबूझकर हवा में सुखाना
• नाभिकीय बनाम कोशिका द्रव्य अभिरंजन
• पैपानिकोलाउ दाग (पारदर्शी, बहुरंगी)
• हवा में सूखे स्मीयरों के लिए रोमनोव्स्की दाग
• सूखने से उत्पन्न कलाकृति और नाभिकीय विवरण पर इसका प्रभाव
• कवरस्लिपिंग, क्लियरिंग और स्लाइड की स्थायित्व

Mechanisms

स्थिरीकरण स्वलयन (autolysis) को रोकता है और कोशिकीय प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड को अपनी जगह पर स्थिर करता है। कोशिका विज्ञान में प्रमुख फिक्सेटिव इथेनॉल या एक अल्कोहल-आधारित स्प्रे है जिसे स्मीयर के अभी भी गीले होने पर लगाया जाता है (गीला स्थिरीकरण), जो पैपानिकोलाउ दाग के लिए आवश्यक महीन नाभिकीय क्रोमेटिन को संरक्षित करता है। वैकल्पिक रूप से, एक स्मीयर को हवा में सूखने दिया जाता है, एक ऐसी स्थिति जो कोशिकाओं को चपटा और बड़ा करती है और रोमनोव्स्की दागों के लिए आवश्यक तैयारी है। अभिरंजन फिर कोशिकीय घटकों के लिए आवेशित रंगों की आत्मीयता का फायदा उठाता है: मूल (धनायनिक) रंग अम्लीय नाभिकीय क्रोमेटिन को बांधते हैं, जबकि अम्लीय (ऋणायनिक) रंग कोशिका द्रव्य प्रोटीन को रंगते हैं। पैपानिकोलाउ दाग एक नाभिकीय हीमेटॉक्सिलिन को कई प्रतिदागों के साथ जोड़ता है ताकि पारदर्शी, बहुरंगी कोशिकाएं मिलें; रोमनोव्स्की दाग एज़ूर और ईओसिन रंगों को जोड़ते हैं जिनकी परस्पर क्रिया विशिष्ट बैंगनी क्रोमेटिन और मेटाक्रोमैटिक रंग उत्पन्न करती है (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982; Koss & Melamed 2006)।

Clinical relevance

चूंकि स्थिरीकरण और अभिरंजन कोशिकाओं को वर्गीकृत करने के लिए उपयोग की जाने वाली विशेषताओं की दृश्यता निर्धारित करते हैं, वे कोशिका विज्ञान निदान और रिपोर्टिंग से अविभाज्य हैं। यह प्रविष्टि प्रयोगशाला अभ्यास को समझने के लिए पृष्ठभूमि के रूप में विधियों और उनके तर्क का वर्णन करती है; यह व्यक्तिगत नैदानिक निर्णयों का आधार नहीं है।

Evidence & guidelines

कार्यप्रणाली साहित्य दो महान दाग परिवारों - नाभिकीय और क्रोमेटिन विवरण के लिए अल्कोहल-स्थिर पैपानिकोलाउ दाग और कोशिका द्रव्य और पृष्ठभूमि विशेषताओं के लिए हवा में सूखे रोमनोव्स्की दाग - की पूरक भूमिकाओं को स्थापित करता है और विट्टेकिंड के मानकीकरण कार्य ने एज़ूर बी-ईओसिन वाई संयोजन को एक संदर्भ रोमनोव्स्की-गिमसा दाग के रूप में परिभाषित किया (Wittekind 1982; Bibbo & Wilbur 2014)। संदर्भ ग्रंथ इस बात पर जोर देते हैं कि स्थिरीकरण का समय और गुणवत्ता दाग के परिणाम और सूखने से प्रेरित नाभिकीय विकृति जैसे कलाकृतियों के प्रमुख नियंत्रणीय निर्धारक हैं (Koss & Melamed 2006)।

History

कोशिका विज्ञान का अभिरंजन उन्नीसवीं सदी के हिस्टोकेमिस्ट्री और रोमनोव्स्की और गिमसा के रुधिर विज्ञान के दागों से विकसित हुआ, फिर 1940 के दशक में पैपानिकोलाउ के बहुरंगी, गीले-स्थिर स्मीयरों के लिए पारदर्शी दाग द्वारा एक्सफोलिएटिव कोशिका विज्ञान के लिए रूपांतरित किया गया। बाद के बीसवीं सदी के काम, जिसमें विट्टेकिंड के डाई-मानकीकरण अध्ययन शामिल थे, ने रोमनोव्स्की अभिरंजन को प्रयोगशालाओं में प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य बनाने की मांग की (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982)।

Key figures

• George Papanicolaou
• Dietrich Wittekind

Seminal works

• papanicolaou-1942
• wittekind-1982
• koss-melamed-2006

Frequently asked questions

कुछ कोशिका विज्ञान के स्मीयरों को गीले रहते हुए ही क्यों स्थिर करना चाहिए?

गीला (अल्कोहल) स्थिरीकरण महीन नाभिकीय क्रोमेटिन विवरण को संरक्षित करता है जिस पर पैपानिकोलाउ दाग निर्भर करता है। यदि ऐसा स्मीयर स्थिरीकरण से पहले सूख जाता है, तो सूखने से उत्पन्न कलाकृति नाभिक को विकृत कर देती है और व्याख्या को खराब कर देती है।

कौन सा दाग एक कोशिका विज्ञान के नमूने को प्राप्त होता है, यह क्या निर्धारित करता है?

यह स्थिरीकरण की स्थिति और नैदानिक प्रश्न द्वारा निर्धारित होता है: गीले-स्थिर स्मीयर नाभिकीय विवरण के लिए पैपानिकोलाउ दाग लेते हैं, जबकि जानबूझकर हवा में सूखे स्मीयर एक रोमनोव्स्की दाग लेते हैं जो कोशिका द्रव्य और पृष्ठभूमि की विशेषताओं को उजागर करता है।