कवक संवर्धन और पृथक्करण

कवक संवर्धन रोगी के नमूने से कृत्रिम माध्यम पर कवक उगाने की एक विधि है ताकि एक व्यवहार्य जीव को पुनः प्राप्त किया जा सके, उसकी जांच की जा सके, पहचान की जा सके और परीक्षण किया जा सके। प्रत्यक्ष पहचान विधियों की तुलना में धीमी गति से परिणाम मिलने के बावजूद, संवर्धन एक संदर्भ मानक बना हुआ है क्योंकि यह निश्चित प्रजाति की पहचान और एंटीफंगल संवेदनशीलता परीक्षण के लिए एक जीवित पृथक्करण प्रदान करता है।

Definition

कवक संवर्धन और पृथक्करण प्रयोगशाला तकनीकों का एक समूह है जो कवक के विकास के अनुकूल परिस्थितियों में चयनात्मक या समृद्ध माध्यमों को इनोक्यूलेट करके नैदानिक सामग्री से व्यवहार्य कवक को पुनः प्राप्त करता है, जिससे आगे की पहचान और परीक्षण के लिए एक शुद्ध पृथक्करण प्राप्त होता है।

Scope

यह विषय नैदानिक नमूनों से कवक को पुनः प्राप्त करने के सिद्धांतों को शामिल करता है: चयनात्मक और समृद्ध माध्यम, ऊष्मायन की स्थिति, संवर्धन में यीस्ट और मोल्ड के बीच अंतर, और कैसे एक शुद्ध पृथक्करण आकृति विज्ञान, मास स्पेक्ट्रोमेट्री, या अनुक्रमण द्वारा पहचान का समर्थन करता है। यह संवर्धन को एक प्रयोगशाला विधि के रूप में मानता है और नमूना-संग्रह प्रोटोकॉल या उपचार मार्गदर्शन नहीं देता है।

Core questions

• किसी दिए गए नमूने में संदिग्ध कवक को पुनः प्राप्त करने के लिए कौन से माध्यम और ऊष्मायन की स्थिति सबसे अच्छी है?
• नैदानिक रूप से महत्वपूर्ण पृथक्करण को पर्यावरणीय संदूषण से कैसे अलग किया जाता है?
• संवर्धन-आधारित पहचान को अनुक्रमण या मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा पुष्टि की आवश्यकता कब होती है?
• आक्रामक कवक रोग में संवर्धन संवेदनशीलता की सीमाएं क्या हैं?

Key concepts

• चयनात्मक और समृद्ध माध्यम (जैसे, सबौरॉड अगर)
• यीस्ट बनाम मोल्ड विकास
• ऊष्मायन तापमान और समय
• शुद्ध पृथक्करण और उपसंवर्धन
• संदूषण बनाम सच्चा रोगजनक
• संवेदनशीलता परीक्षण के लिए सब्सट्रेट के रूप में संवर्धन
• पृथक्करण की पॉलीफेसिक पहचान

Mechanisms

नमूनों को ऐसे माध्यमों पर इनोक्यूलेट किया जाता है जो कवक के विकास का समर्थन करने के लिए तैयार किए जाते हैं जबकि प्रतिस्पर्धी जीवाणुओं को दबाते हैं, शास्त्रीय रूप से सबौरॉड डेक्सट्रोज अगर, कभी-कभी जीवाणुरोधी या चयनात्मक योजक के साथ। प्लेटों और स्लैंट्स को ऊष्मायन किया जाता है, अक्सर लंबी अवधि के लिए क्योंकि कई कवक धीरे-धीरे बढ़ते हैं, और द्विरूपता या थर्मोटोलरेंस को प्रकट करने के लिए चुने गए तापमान पर। फिर विकास का आकलन किया जाता है: यीस्ट पेस्टी उपनिवेश बनाते हैं, जबकि मोल्ड फिलामेंटस, अक्सर रंगीन उपनिवेश उत्पन्न करते हैं जिनकी मैक्रोस्कोपिक और माइक्रोस्कोपिक आकृति विज्ञान पहचान का मार्गदर्शन करती है। शुद्ध पृथक्करण जो संवर्धन प्रदान करता है वह वह सब्सट्रेट है जिस पर प्रजातियों की पुष्टि आकृति विज्ञान, MALDI-TOF मास स्पेक्ट्रोमेट्री, या डीएनए अनुक्रमण द्वारा की जाती है, और जिस पर एंटीफंगल संवेदनशीलता को मापा जाता है। क्योंकि व्यवहार्य जीव विरल हो सकते हैं, गहरे या उपचारित संक्रमणों में संवर्धन असंवेदनशील हो सकता है, यही कारण है कि इसकी व्याख्या प्रत्यक्ष और आणविक विधियों के साथ की जाती है।

Clinical relevance

संवर्धन इस बात का आधार है कि कवक रोगजनकों की पुष्टि और नामकरण कैसे किया जाता है, और सामान्यतः बाँझ स्थल से एक सकारात्मक संवर्धन आक्रामक कवक रोग की आम सहमति परिभाषाओं के भीतर विशेष नैदानिक महत्व रखता है। यह प्रविष्टि विधि और इसके व्याख्यात्मक मूल्य का वर्णन करती है; यह इस बात पर संदर्भ सामग्री है कि पृथक्करण कैसे प्राप्त किए जाते हैं और नमूना प्रबंधन या रोगी प्रबंधन के लिए एक मार्गदर्शिका नहीं है।

Evidence & guidelines

ब्रिटिश सोसाइटी फॉर मेडिकल माइकोलॉजी और EORTC/MSGERC आम सहमति परिभाषाओं से सर्वोत्तम-अभ्यास सिफारिशें नैदानिक विधियों के बीच संवर्धन की भूमिका का वर्णन करती हैं, जिसमें बाँझ स्थलों से कवक प्राप्त होने पर इसका महत्व और कुछ आक्रामक संक्रमणों में इसकी ज्ञात असंवेदनशीलता शामिल है। संदर्भ एटलस उपनिवेश और सूक्ष्म आकृति विज्ञान को सूचीबद्ध करते हैं जिसका उपयोग पृथक्करणों की पहचान के लिए किया जाता है।

History

परिभाषित माध्यमों पर संवर्धन चिकित्सा माइकोलॉजी का मूलभूत उपकरण था, जिसमें बीसवीं शताब्दी की शुरुआत में पेश किया गया सबौरॉड का डेक्सट्रोज अगर, कवक को पुनः प्राप्त करने और पहचानने के लिए मानक सब्सट्रेट बन गया। अधिकांश शताब्दी के लिए पहचान संवर्धन से पढ़े गए उपनिवेश और सूक्ष्म आकृति विज्ञान पर आधारित थी, और बाद में ही मास स्पेक्ट्रोमेट्री और अनुक्रमण ने संवर्धित पृथक्करण की पहचान में सटीकता जोड़ी।

Seminal works

• schelenz-2015
• dehoog-2020

Frequently asked questions

कवक संवर्धन में अक्सर इतना समय क्यों लगता है?

कई चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण मोल्ड और कुछ यीस्ट धीरे-धीरे बढ़ते हैं, इसलिए दृश्य विकास और विश्वसनीय पहचान की अनुमति देने के लिए संस्कृतियों को दिनों से हफ्तों तक रखा जा सकता है, यही एक कारण है कि तेज प्रत्यक्ष और आणविक विधियों का उपयोग संवर्धन के साथ किया जाता है।

क्या सकारात्मक कवक संवर्धन का हमेशा संक्रमण होता है?

आवश्यक नहीं। कवक पर्यावरण में और शरीर की सतहों पर आम हैं, इसलिए एक सकारात्मक संवर्धन की व्याख्या संदर्भ में की जानी चाहिए; सामान्यतः बाँझ स्थल से पुनः प्राप्ति दूषित या उपनिवेशित नमूने की तुलना में कहीं अधिक सार्थक है।