कवक के लिए सूक्ष्मदर्शी और अभिरंजन विधियाँ

प्रत्यक्ष सूक्ष्मदर्शी और अभिरंजन प्रयोगशाला को संवर्ध (कल्चर) की प्रतीक्षा किए बिना एक नमूने में कवकीय तत्वों को देखने की सुविधा देते हैं। साधारण वेट प्रिपरेशन, प्रतिदीप्त ब्राइटनर और ऊतक अभिरंजक हाइफी, यीस्ट और बीजाणुओं को प्रकट करते हैं, जिससे कवक की उपस्थिति और, ऊतक में, आक्रमण का त्वरित प्रमाण मिलता है।

Definition

कवक के लिए सूक्ष्मदर्शी और अभिरंजन विधियाँ वे तकनीकें हैं जो नैदानिक नमूनों या ऊतक वर्गों में कवकीय संरचनाओं को दृश्यमान बनाती हैं, जिसमें स्पष्ट करने वाले एजेंट, प्रतिदीप्त कोशिका-भित्ति बाइंडर, या हिस्टोकेमिकल अभिरंजक का उपयोग करके प्रकाश या प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी के तहत हाइफी, यीस्ट और बीजाणुओं को प्रदर्शित किया जाता है।

Scope

यह विषय कवक को देखने की विधियों को शामिल करता है: पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड वेट माउंट जो नमूनों को साफ करते हैं, कैल्कोफ्लोर व्हाइट जैसे प्रतिदीप्त अभिरंजक जो कवकीय कोशिका भित्ति से बंधते हैं, और ऊतक वर्गों पर उपयोग किए जाने वाले हिस्टोपैथोलॉजिकल अभिरंजक। यह यह भी बताता है कि आकृति विज्ञान (मॉर्फोलॉजी) प्रेक्षक को पहचान के बारे में क्या बता सकता है और क्या नहीं। यह एक वर्णनात्मक विधि संदर्भ है, न कि एक नैदानिक या उपचार प्रोटोकॉल।

Core questions

• क्या इस नमूने में कवकीय तत्व मौजूद हैं, और वे क्या रूपात्मक रूप लेते हैं?
• वेट प्रिपरेशन बनाम ऊतक खंड में कवक को सबसे अच्छी तरह से कौन सा अभिरंजक प्रदर्शित करता है?
• अकेले आकृति विज्ञान कवक की पहचान को कितना कम कर सकता है?
• क्या सूक्ष्मदर्शी सतह उपनिवेशीकरण के विपरीत ऊतक आक्रमण को दर्शाता है?

Key concepts

• पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड (KOH) वेट माउंट
• कैल्कोफ्लोर व्हाइट प्रतिदीप्त अभिरंजक
• पीरियोडिक एसिड-शिफ (PAS) अभिरंजक
• ग्रोकॉट-गोमोरी मेथेनामिन सिल्वर (GMS) अभिरंजक
• हाइफी, यीस्ट और स्यूडोहाइफी
• ऊतक आक्रमण बनाम उपनिवेशीकरण
• रूपात्मक पहचान की सीमाएँ

Mechanisms

एक KOH प्रिपरेशन में, पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड केराटिन और अन्य मेजबान सामग्री को घोल देता है, जिससे अपवर्तक कवकीय भित्तियाँ सूक्ष्मदर्शी के नीचे दिखाई देती हैं। कैल्कोफ्लोर व्हाइट जैसे प्रतिदीप्त ब्राइटनर कवकीय कोशिका भित्ति में काइटिन और सेलूलोज़ से बंधते हैं और पराबैंगनी प्रकाश के तहत प्रतिदीप्त होते हैं, जिससे हाइफी और यीस्ट एक गहरे पृष्ठभूमि के खिलाफ स्पष्ट रूप से रेखांकित होते हैं। ऊतक में, विशेष अभिरंजक पॉलीसैकराइड-समृद्ध भित्ति का फायदा उठाते हैं: पीरियोडिक एसिड-शिफ कवकीय भित्तियों को मैजेंटा में उजागर करता है, और ग्रोकॉट-गोमोरी मेथेनामिन सिल्वर उन्हें काला करने के लिए चांदी जमा करता है, जिससे कवक को वर्गों के भीतर देखा जा सकता है और, महत्वपूर्ण रूप से, ऊतक पर आक्रमण के रूप में आंका जा सकता है। आकृति विज्ञान, हाइफी का शाखाकरण पैटर्न, यीस्ट या स्यूडोहाइफी की उपस्थिति, और सेप्टेशन, अंतर को कम करता है लेकिन शायद ही कभी प्रजातियों के लिए विशिष्ट होता है, इसलिए निश्चित पहचान के लिए सूक्ष्मदर्शी को संवर्ध (कल्चर), एंटीजन, या आणविक विधियों के साथ जोड़ा जाता है।

Clinical relevance

सूक्ष्मदर्शी सबसे तेज़ प्रमाणों में से कुछ प्रदान करता है कि एक कवक मौजूद है और, ऊतक में, कि यह आक्रमण कर रहा है, जो आक्रामक कवकीय रोग को कैसे पहचाना जाता है, इसके लिए केंद्रीय है। यह प्रविष्टि संदर्भ सामग्री के रूप में विधियों और उनकी व्याख्यात्मक सीमाओं की व्याख्या करती है; यह नमूना तैयार करने या रोगियों के प्रबंधन पर निर्देश नहीं देती है।

Evidence & guidelines

कवकीय हिस्टोपैथोलॉजी की समीक्षाएं ऊतक में कवक को प्रदर्शित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले अभिरंजकों और रूपात्मक सुरागों, और उपस्थिति से जीवों की पहचान की सीमाओं का दस्तावेजीकरण करती हैं। गंभीर कवकीय रोग के निदान के लिए सर्वोत्तम-अभ्यास सिफारिशें प्रत्यक्ष सूक्ष्मदर्शी और प्रतिदीप्त अभिरंजन को संवर्ध (कल्चर) और आणविक परीक्षणों के साथ उपयोग की जाने वाली तीव्र अग्रिम पंक्ति की विधियों के रूप में रखती हैं।

History

प्रत्यक्ष सूक्ष्मदर्शी सबसे पुरानी माइकोलॉजिकल विधियों में से एक है, जिसमें डर्माटोफाइट्स और अन्य कवक को प्रदर्शित करने के लिए KOH वेट माउंट का लंबे समय से उपयोग किया जाता रहा है। ग्रोकॉट-गोमोरी मेथेनामिन सिल्वर और पीरियोडिक एसिड-शिफ विधियों जैसे हिस्टोकेमिकल अभिरंजक बीसवीं शताब्दी में ऊतक में कवक को दिखाने के लिए मानक बन गए, और प्रतिदीप्त ब्राइटनर ने बाद में पराबैंगनी प्रकाश के तहत कोशिका भित्तियों को चमकाकर संवेदनशीलता बढ़ाई।

Seminal works

• guarner-2011
• dehoog-2020

Frequently asked questions

क्या सूक्ष्मदर्शी सटीक कवकीय प्रजातियों की पहचान कर सकता है?

आमतौर पर नहीं। सूक्ष्मदर्शी यह दिखा सकता है कि कवक मौजूद हैं और यीस्ट या मोल्ड जैसी व्यापक श्रेणियों का सुझाव दे सकता है, लेकिन सटीक प्रजाति पहचान के लिए आम तौर पर संवर्ध (कल्चर), मास स्पेक्ट्रोमेट्री, या डीएनए अनुक्रमण की आवश्यकता होती है।

कवक को देखने के लिए कैल्कोफ्लोर व्हाइट क्यों उपयोगी है?

कैल्कोफ्लोर व्हाइट कवकीय कोशिका भित्ति के घटकों से बंधता है और पराबैंगनी प्रकाश के तहत प्रतिदीप्त होता है, जिससे विरल हाइफी और यीस्ट भी चमकीले रूप से दिखाई देते हैं, जो बिना अभिरंजित वेट माउंट की तुलना में पता लगाने में सुधार करता है।