免疫组织化学和蛋白质检测方法

免疫组织化学（IHC）利用与可见标记偶联的抗体，在组织切片中定位和测量蛋白质，显示基因产物的表达位置和半定量表达量。作为转录物定量的蛋白质水平对应方法，它是诊断和分子病理学中的常规工具。

Definition

免疫组织化学是一种基于组织的方法，利用标记抗体在原位检测特定蛋白质，可视化其细胞和亚细胞位置，并提供蛋白质表达的半定量估计。

Scope

本主题涵盖了基于抗体的检测原理、定性定位与染色强度和范围的半定量评分之间的区别、标准化和对照的重要性，以及激素受体和HER2评估等著名应用作为方法示例。它将IHC视为一种测量方法，不提供诊断阈值或治疗指导。

Core questions

• 标记抗体如何在组织切片中定位蛋白质？
• 染色如何转化为半定量评分？
• 为什么对照和标准化对于可重复的IHC至关重要？
• 蛋白质水平检测如何补充转录物定量？

Key concepts

• 抗体-抗原结合
• 抗原修复
• 显色和荧光检测
• 半定量评分（强度和范围）
• 阳性对照和阴性对照
• 分析前固定效应

Mechanisms

初级抗体与固定组织切片中的靶抗原结合；通过次级抗体和酶联或荧光团联系统放大检测，在抗原位置产生有色或荧光沉积。固定和抗原修复步骤会影响表位是否仍然可检测，因此分析前处理强烈影响结果。表达通过判断染色强度和阳性细胞比例进行半定量读取，通常组合成一个评分；由于这种读取依赖于观察者和方案，因此需要经过验证的对照和标准化程序以确保可重复性。专业指南阐述了如何对受体检测的评分和分析前变量进行标准化（Hammond et al., 2010; Wolff et al., 2013）。

Clinical relevance

IHC是组织诊断和蛋白质生物标志物报告的核心，理解其半定量性质是解读病理报告的一部分。本条目描述了该方法及其标准化；引用的指南旨在说明方法学和报告，而非为个体患者提供诊断临界值或治疗决策。

Evidence & guidelines

半定量IHC的标准化以ASCO/CAP关于雌激素和孕激素受体检测（Hammond et al., 2010）以及乳腺癌HER2检测（Wolff et al., 2013）的联合指南为例，这些指南定义了分析前处理、评分和对照要求。此处引用这些指南作为方法学参考。

History

基于抗体的组织染色技术从20世纪中叶的免疫荧光发展而来，随后出现了酶联免疫过氧化物酶方法，实现了永久性的、可在光学显微镜下观察的染色。随着蛋白质生物标志物在病理学中变得至关重要，人们的注意力转向了固定、抗原修复和评分的标准化，并在受体检测的共识指南中得到了正式确立（Hammond et al., 2010; Wolff et al., 2013）。

Debates

半定量IHC评分的可重复性如何？

由于染色强度和范围是目视判断的，并取决于固定和方案，结果可能因观察者和实验室而异；通过标准化的分析前处理、经过验证的对照和明确的评分标准来提高可重复性。

Key figures

• M. Elizabeth Hammond
• Antonio Wolff
• D. Craig Allred

Seminal works

• hammond-2010
• wolff-2013

Frequently asked questions

免疫组织化学是定量的吗？

IHC最好被描述为半定量：它通过判断染色强度和阳性细胞的比例来估计蛋白质表达，而不是产生精确的浓度，这就是为什么标准化评分和对照很重要。

为什么组织固定会影响IHC结果？

固定和随后的抗原修复步骤可以掩盖或暴露抗体结合的表位，因此分析前处理的变化会改变染色结果，必须标准化以获得可靠的结果。