Đếm tế bào lympho và đo tế bào dòng chảy trong đánh giá miễn dịch

Tế bào lympho thực hiện miễn dịch thích ứng, và số lượng cũng như thành phần quần thể phụ của chúng là trung tâm để đánh giá tình trạng miễn dịch. Đo tế bào dòng chảy là phương pháp xét nghiệm chính để đếm tế bào lympho và xác định các quần thể phụ của chúng dựa trên các dấu ấn mà chúng biểu hiện, làm cho nó trở thành công cụ chủ yếu trong đánh giá miễn dịch và đặc trưng hóa bệnh lý bạch huyết.

Definition

Đếm tế bào lympho là phép đo định lượng tế bào lympho và các quần thể phụ của chúng; đo tế bào dòng chảy là kỹ thuật đo các đặc tính vật lý và huỳnh quang của các tế bào trong dịch treo để xác định và đếm các quần thể dựa trên kiểu hình miễn dịch của chúng.

Scope

Chủ đề này bao gồm việc đếm tế bào lympho và định kiểu miễn dịch bằng phương pháp đo tế bào dòng chảy: đo tổng số tế bào lympho và các quần thể phụ của chúng (như tế bào T, B và tế bào diệt tự nhiên), việc sử dụng số lượng tế bào T CD4 làm chỉ số tình trạng miễn dịch, và vai trò của các bảng kháng thể tiêu chuẩn hóa trong việc đặc trưng hóa các quần thể bạch huyết phản ứng và tân sinh. Đây là mô tả tham khảo về phương pháp và các ứng dụng của nó, không phải là hướng dẫn lâm sàng hoặc diễn giải cho bất kỳ cá nhân nào.

Core questions

• Đo tế bào dòng chảy xác định và đếm các quần thể phụ tế bào lympho như thế nào?
• Số lượng tế bào T CD4 đại diện cho điều gì và được đo lường đáng tin cậy như thế nào?
• Các bảng kháng thể tiêu chuẩn hóa cải thiện khả năng tái lập của định kiểu miễn dịch như thế nào?
• Đo tế bào dòng chảy được sử dụng như thế nào để phân biệt quần thể bạch huyết phản ứng với quần thể tân sinh?

Key concepts

• Nguyên lý đo tế bào dòng chảy (tán xạ ánh sáng và huỳnh quang)
• Định kiểu miễn dịch và các dấu ấn CD
• Các quần thể phụ tế bào lympho (tế bào T, B, NK)
• Đếm tế bào T CD4
• Đếm trên một nền tảng so với đếm trên hai nền tảng
• Chiến lược phân cổng (Gating strategy)
• Các bảng kháng thể tiêu chuẩn hóa (EuroFlow)
• Đánh giá tính đơn dòng

Mechanisms

Trong đo tế bào dòng chảy, các tế bào trong dịch treo đi qua từng hàng một qua một hoặc nhiều chùm tia laser; sự tán xạ ánh sáng phía trước và bên cạnh cho biết kích thước và độ phức tạp của tế bào, trong khi các kháng thể liên hợp huỳnh quang gắn với kháng nguyên bề mặt hoặc nội bào cho biết tế bào biểu hiện những dấu ấn nào. Bằng cách kết hợp các dấu ấn và áp dụng chiến lược phân cổng (gating strategy), các quần thể như tế bào T CD4 và CD8, tế bào B và tế bào diệt tự nhiên được xác định và đếm (Maecker 2015). Số lượng có thể được thu thập trên một nền tảng duy nhất (trực tiếp số tế bào trên mỗi thể tích) hoặc bằng cách kết hợp phần trăm với một số lượng tế bào riêng biệt; phương pháp nền tảng đơn thường được ưu tiên để có độ chính xác cao hơn trong việc đếm CD4 (Whitby 2013). Các bảng kháng thể tiêu chuẩn hóa, đã được xác nhận – như các bảng EuroFlow – giúp định kiểu miễn dịch có thể tái lập giữa các phòng thí nghiệm và hỗ trợ nhận diện các quần thể bạch huyết bất thường hoặc đơn dòng, điều này góp phần vào việc phân loại các khối u bạch huyết (van Dongen 2012; Swerdlow 2016).

Clinical relevance

Việc đếm tế bào lympho là cơ sở để đánh giá tình trạng miễn dịch – ví dụ, số lượng tế bào T CD4 là một chỉ số đã được thiết lập từ lâu trong bối cảnh nhiễm HIV – và định kiểu miễn dịch là không thể thiếu để đặc trưng hóa các rối loạn tăng sinh lympho và suy giảm miễn dịch. Mục này giải thích cách phương pháp hoạt động và những gì nó đo lường ở cấp độ quần thể và phòng thí nghiệm; nó không phải là cơ sở để chẩn đoán, phân giai đoạn hoặc điều trị cá nhân.

Evidence & guidelines

Định kiểu miễn dịch có thể tái lập được dựa trên các bảng kháng thể tiêu chuẩn hóa (van Dongen 2012) và hướng dẫn đồng thuận về đo tế bào dòng chảy và đo tế bào khối phổ để theo dõi miễn dịch (Maecker 2015). Các nghiên cứu phương pháp luận xác định giới hạn đo lường của việc đếm CD4 và lợi thế của việc đếm trên một nền tảng duy nhất (Whitby 2013), và các loại kiểu hình miễn dịch góp phần vào phân loại khối u bạch huyết của Tổ chức Y tế Thế giới (Swerdlow 2016).

Debates

Đếm CD4 trên một nền tảng so với đếm trên hai nền tảng

Các phương pháp trên một nền tảng thu được số lượng tuyệt đối trực tiếp và thường cho thấy sai số thấp hơn so với các phương pháp trên hai nền tảng kết hợp phần trăm với số lượng tế bào riêng biệt, điều này đã ảnh hưởng đến thực hành khuyến nghị cho việc đếm CD4.

Seminal works

• vandongen-2012
• maecker-2015
• swerdlow-2016

Frequently asked questions

Số lượng CD4 đo lường điều gì?

Số lượng CD4 đo lường số lượng tế bào lympho T biểu hiện dấu ấn CD4, thường là trên mỗi microlit máu; nó được sử dụng làm chỉ số tình trạng miễn dịch, điển hình trong bối cảnh nhiễm HIV.

Đo tế bào dòng chảy phân biệt các loại tế bào lympho như thế nào?

Các kháng thể được gắn nhãn huỳnh quang liên kết với các dấu ấn bề mặt cụ thể, và máy đo tế bào dòng chảy phát hiện những dấu ấn nào mà mỗi tế bào mang, cho phép phân biệt và đếm các quần thể như tế bào T, tế bào B và tế bào diệt tự nhiên.