Örnek Fiksasyonu ve Boyanması
Fiksasyon ve boyama, biriktirilmiş sitolojik bir örneği yorumlanabilir bir lam haline getiren iki kimyasal adımdır. Fiksasyon, hücreleri stabilize etmekte ve iç yapılarını korumaktadır; boyama ise sitopatoloğun çekirdeği sitoplazmadan ayırt etmesini ve kromatin detayını okumasını sağlayan renkleri ve kontrastı vermektedir. Fiksasyon yönteminin boya ile eşleştirilmesi, hangi hücresel özelliklerin vurgulanacağını belirleyen bilinçli bir seçimdir.
Tanım
Örnek fiksasyonu ve boyanması, hücresel morfolojiyi koruyan (fiksasyon) ve hücresel bileşenlere seçici renk veren (boyama) hazırlık adımlarıdır, böylece sitolojik bir lam mikroskop altında okunabilmektedir.
Kapsam
Bu madde, sitolojik örneklerin neden ve nasıl fikse edildiğini (ıslak fiksasyon ve kasıtlı hava ile kurutma), başlıca sitolojik boyaların prensiplerini ve fiksasyon-boya kombinasyonunun tanısal soruya nasıl eşleştirildiğini açıklamaktadır. Bu, yöntem düzeyinde bir referanstır ve hastaya özgü talimatlar içermemektedir.
Anahtar kavramlar
- Koagülan alkol fiksasyonu ve ıslak fiksasyon
- Hazırlık durumu olarak kasıtlı hava ile kurutma
- Nükleer ve sitoplazmik boyama
- Papanicolaou boyası (şeffaf, polikromatik)
- Hava ile kurutulmuş yaymalar için Romanowsky boyaları
- Kuruma artefaktı ve nükleer detay üzerindeki etkisi
- Lamelleme, şeffaflaştırma ve lam kalıcılığı
Mekanizmalar
Fiksasyon, otolizi durdurmakta ve hücresel proteinler ile nükleik asitleri yerinde sabitlemektedir. Sitolojide baskın fiksatif, yaymanın hala ıslakken uygulandığı etanol veya alkol bazlı bir spreydir (ıslak fiksasyon), bu da Papanicolaou boyası için gerekli olan ince nükleer kromatini korumaktadır. Alternatif olarak, bir yaymanın havada kurumasına izin verilmektedir; bu durum hücreleri düzleştirmekte ve büyütmekte olup Romanowsky boyaları için gerekli hazırlıktır. Boyama daha sonra yüklü boyaların hücresel bileşenlere olan afinitesini kullanmaktadır: bazik (katyonik) boyalar asidik nükleer kromatini bağlarken, asidik (anyonik) boyalar sitoplazmik proteinleri renklendirmektedir. Papanicolaou boyası, şeffaf, polikromatik hücreler elde etmek için nükleer hematoksilini çoklu karşıt boyalarla birleştirmektedir; Romanowsky boyaları ise etkileşimleri karakteristik mor kromatini ve metakromatik renkleri üreten azur ve eozin boyalarını birleştirmektedir (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982; Koss & Melamed 2006).
Klinik önem
Fiksasyon ve boyama, hücreleri sınıflandırmak için kullanılan özelliklerin görünürlüğünü belirlediğinden, sitolojik tanı ve raporlamadan ayrı düşünülemezler. Bu madde, laboratuvar uygulamasını anlamak için yöntemleri ve gerekçelerini bir arka plan olarak tanımlamaktadır; bireysel klinik kararlar için bir temel değildir.
Kanıt ve kılavuzlar
Metodolojik literatür, iki büyük boya ailesinin tamamlayıcı rollerini ortaya koymaktadır: nükleer ve kromatin detayı için alkol ile fikse edilmiş Papanicolaou boyası ve sitoplazmik ve arka plan özellikleri için havada kurutulmuş Romanowsky boyaları. Wittekind'in standardizasyon çalışması, azur B-eozin Y kombinasyonunu referans bir Romanowsky-Giemsa boyası olarak tanımlamıştır (Wittekind 1982; Bibbo & Wilbur 2014). Referans metinler, fiksasyon zamanlaması ve kalitesinin, boyama sonucunun ve kuruma kaynaklı nükleer distorsiyon gibi artefaktların başlıca kontrol edilebilir belirleyicileri olduğunu vurgulamaktadır (Koss & Melamed 2006).
Tarihçe
Sitolojik boyama, on dokuzuncu yüzyıl histokimyasından ve Romanowsky ile Giemsa'nın hematoloji boyalarından gelişmiş, ardından 1940'larda Papanicolaou'nun ıslak fikse edilmiş yaymalar için polikromatik, şeffaf boyası ile eksfolyatif sitoloji için dönüştürülmüştür. Daha sonraki yirminci yüzyıl çalışmaları, Wittekind'in boya standardizasyon çalışmalarını da içerecek şekilde, Romanowsky boyamasını laboratuvarlar arasında tekrarlanabilir hale getirmeyi amaçlamıştır (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982).
Öne çıkan isimler
- George Papanicolaou
- Dietrich Wittekind
İlgili konular
Temel eserler
- papanicolaou-1942
- wittekind-1982
- koss-melamed-2006
Sıkça sorulan sorular
- Bazı sitoloji yaymaları neden hala ıslakken fikse edilmelidir?
- Islak (alkol) fiksasyon, Papanicolaou boyasının bağlı olduğu ince nükleer kromatin detayını korumaktadır. Böyle bir yayma fiksasyondan önce kurursa, kuruma artefaktı çekirdekleri bozmakta ve yorumu olumsuz etkilemektedir.
- Bir sitoloji örneğinin hangi boyayı alacağını ne belirler?
- Bu, fiksasyon durumu ve tanısal soru tarafından belirlenmektedir: ıslak fikse edilmiş yaymalar nükleer detay için Papanicolaou boyasını alırken, kasıtlı olarak havada kurutulmuş yaymalar sitoplazmik ve arka plan özelliklerini vurgulayan bir Romanowsky boyası almaktadır.