MTT/MTS Deneyi
MTT/MTS Cell Viability and Proliferation Assay · Ayrıca şöyle bilinir: 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, tetrazolium assay, mitochondrial activity assay
Mosmann tarafından 1983'te tanıtılan MTT deneyi, mitokondriyal metabolik aktiviteyi ölçerek hücre canlılığını ve çoğalmasını ölçmek için kullanılan kolorimetrik bir yöntemdir. Yöntem, aktif mitokondriler tarafından suda çözünen tetrazolyum tuzu MTT'nin (3-(4,5-dimetil-tiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür) dönüşümünü tespit ederek, canlı hücre sayısıyla orantılı olarak çözünmeyen mor bir formazan çökeltisi üretir. Çözünürleştirme gerektirmeyen ilgili MTS deneyi, gelişmiş kinetik sunar ve artık hem akademik araştırmalarda hem de ilaç geliştirmede yaygın olarak kullanılmaktadır.
Tam yöntemi oku
Bu bölümü okumak için ücretsiz hesapla giriş yapın.
Yöntem haritası
İlişkili yöntemlerin komşuluğu — keşfetmek için bir düğüm seçin.
Ne zaman kullanılır
MTT deneyi, ilaç toksisitesi taraması, biyomateryal ve iskelelerin biyouyumluluğunun değerlendirilmesi ve büyüme faktörlerine veya kültür koşullarına yanıt olarak hücre çoğalmasının ölçülmesi için idealdir. Tanımlanmış bir zaman noktasında tek bir ölçümün kabul edilebilir olduğu uç nokta deneyleri için tercih edilir. Ancak, deney yıkıcıdır (hücreler daha fazla analiz için kurtarılamaz), sınırlı kinetik bilgiye sahiptir ve metabolik olarak inaktif ancak ölü olmayan hücreler için yanlış pozitifler üretebilir. Gerçek zamanlı izleme veya kinetik çalışmalar için, etiketsiz empedans tabanlı yöntemleri veya floresan canlı hücre deneylerini düşünün. Çözünür bir varyant olarak MTS, daha hızlı kinetiklerin veya azaltılmış kullanımın önemli olduğu durumlarda tercih edilir.
Güçlü yönler & sınırlılıklar
- Basit, hızlı ve uygun maliyetli: deney, mikoplate okuyucu dışında minimum ekipmanla saatler içinde tamamlanabilir.
- Kantitatif ve hassas: kuyucuk başına 10²–10⁵ hücre aralığında hücre sayısındaki değişiklikleri tespit edebilir.
- Yüksek verimli yetenekli: 96 kuyucuklu veya 384 kuyucuklu formatlar, yüzlerce koşulun paralel olarak taranmasını sağlar.
- Uç nokta veya kinetik varyantlar: MTT yalnızca uç noktadır, ancak MTS hücre lizisi olmadan kinetik izlemeye izin verir.
- Yaygın olarak standartlaştırılmış: deney, düzenleyici testlerde ve ilaç geliştirmede iyi kurulmuştur, yorumlama için geniş bir geçmişe sahiptir.
- Uç nokta deneyi: hücreler lizise uğrar ve yok edilir, bu da sonraki analizleri veya canlı hücrelerin kurtarılmasını engeller.
- MTT için yavaş kinetik: çökeltme adımı birkaç saat inkübasyon ve çözünürleştirme gerektirir; MTS bunu aşar ancak biraz daha pahalıdır.
- Hücre sağlığı hakkında sınırlı bilgi: metabolik aktivite hücre durumunu tam olarak yakalamaz; apoptozlu hücreler geçici olarak mitokondriyal fonksiyonu koruyabilir.
- Renkli bileşiklerle etkileşim: bazı test bileşikleri (antioksidanlar, indirgeyici ajanlar) tetrazolyum tuzlarını doğrudan indirgeyerek yanlış pozitiflere neden olabilir.
SSS
Neden absorbans okumalarım hücre sayısıyla orantılı değil?
Formazan kristallerinin tam olarak çözünmemesini kontrol edin - yeterli inkübasyon süresini ve çözünürleştirme reaktifi ile kapsamlı pipetlemeyi sağlayın. Ayrıca, kültür ortamında fenol kırmızısı bulunmadığını doğrulayın (570 nm absorbansını etkiler). Bunlar doğruysa, deney çok yüksek hücre yoğunluklarında doygunluğa ulaşmış olabilir; daha az hücre kullanın veya formazan süspansiyonunu seyreltin.
Antioksidan aktiviteye sahip olduğu bilinen bir ilacı test etmek için MTT kullanabilir miyim?
Antioksidanlar ve indirgeyici ajanlar tetrazolyum tuzlarını doğrudan indirgeyerek yanlış pozitiflere neden olabilir. Bu tür bileşikler için, LDH salım deneyi veya canlı/ölü boyama deneyi gibi indirgeme kimyasından bağımsız, paralel bir kolorimetrik deney kullanın. Alternatif olarak, yanlış sinyalleri tespit etmek için test bileşiğinizle kimyasal olarak ilişkili pozitif ve negatif kontrolleri dahil edin.
MTT ve MTS arasındaki fark nedir ve hangisini kullanmalıyım?
MTT, deneyden sonra bir çözünürleştirme adımı gerektirir ve daha yavaş kinetiğe sahiptir ancak daha ucuzdur. MTS suda çözünür, çözünürleştirme gerektirmez ve zaman içinde kinetik okumalara izin verir; kinetik deneyler için veya kullanım hızı kritik olduğunda tercih edilir. Uç nokta deneyleri için her ikisi de kabul edilebilirdir; seçim bütçeye ve mevcut ekipmana bağlıdır.
Hücrelerimin gerçekten ölü mü yoksa sadece metabolik olarak hareketsiz mi olduğunu nasıl anlarım?
MTT yalnızca metabolik aktiviteyi ölçer, canlılığı tek başına ölçmez. Ölümü hareketsizlikten ayırt etmek için tamamlayıcı deneyler kullanın: trifan mavisi dışlama ile zar bütünlüğünü ölçün, propidyum iyodür boyaması ile akış sitometrisi yapın veya canlı/ölü floresan boyaları kullanın. Yöntemleri birleştirmek, hücre durumunun daha eksiksiz bir resmini sunar.
Tabaklarımı dondurup deneyi daha sonra çalıştırabilir miyim?
Evet, hücreler genellikle plakalama sonrası veya MTT inkübasyonundan sonra (ancak çözünürleştirmeden önce) dondurulabilir; ancak dondurma bazı hücre tiplerine zarar verebilir. Hücreleri dondurursanız, bir kriyoprotektan (örn. DMSO) kullanın ve dikkatlice çözdürün. Değişkenliği önlemek için deneyi taze tamamlamak tercih edilir.
Kaynaklar
- Mosmann, T. (1983). Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods, 65(1-2), 55-63. DOI: 10.1016/0022-1759(83)90303-4 ↗
- Slade, P. G. (1999). MTS tetrazolium compound (abstract). Methods in Cell Biology, 63, 65-72. link ↗
- Riss, T. L., Moravec, R. A., Niles, A. L., et al. (2004). Cell viability assays. In Assay Guidance Manual. Eli Lilly & Company and the National Center for Advancing Translational Sciences. link ↗
Bu sayfayı kaynak gösterin
ScholarGate. (2026, June 3). MTT/MTS Cell Viability and Proliferation Assay. ScholarGate. https://scholargate.app/tr/biomaterials/mtt-mts-assay
Hangi yöntem?
Bu yöntemi en yakın akrabalarının yanına koyup yan yana okuyun — kütüphane kitapları masaya serer; seçim sizindir.
- Elektrospin (Elektro-eğirme)Biyomalzemeler↔ karşılaştır
- Hemoliz TestiBiyomalzemeler↔ karşılaştır
- Canlı/Ölü TahliliBiyomalzemeler↔ karşılaştır
- Çizik Yara TestiBiyomalzemeler↔ karşılaştır