Высокоэффективная жидкостная хроматография

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) разделяет компоненты растительного экстракта на заполненной колонке под высоким давлением с использованием детекторов, которые позволяют получать как характерные профили-«отпечатки», так и точное количественное определение маркерных соединений. Это основной инструментальный метод для количественной стандартизации растительного сырья и центральный инструмент в современном фармакогностическом контроле качества.

Definition

Высокоэффективная жидкостная хроматография — это метод колоночного разделения, при котором жидкая подвижная фаза переносит компоненты образца через заполненную неподвижную фазу под высоким давлением, разделяя их для последующего детектирования, что позволяет идентифицировать их по времени удерживания и профилю, а также количественно определить по отношению к эталонным стандартам.

Scope

Статья охватывает принцип колоночной жидкостной хроматографии, использование ВЭЖХ для снятия «отпечатков» и для количественного анализа маркерных компонентов в неочищенных лекарственных средствах и экстрактах, а также ее место среди хроматографических методов контроля качества. Это методологический справочник, а не клиническое руководство.

Core questions

• Соответствует ли ВЭЖХ-профиль образца эталонному «отпечатку» для заявленного материала?
• Каково количественное содержание маркерных или активных компонентов относительно спецификации?
• Выявляет ли хроматограмма фальсификацию, замену или компоненты, выходящие за пределы допустимых значений?

Key concepts

• Колоночная жидкостная хроматография под высоким давлением
• Неподвижная и подвижная фазы; обращенно-фазовое разделение
• Время удерживания и разрешение
• Детекторы (УФ/ДАД, МС, ЭЛСД)
• Количественный анализ по эталонным стандартам
• ВЭЖХ-«отпечаток» и маркерные соединения
• Хемометрический анализ «отпечатков»

Mechanisms

Насос подает жидкую подвижную фазу, несущую растворенный образец, через колонку, заполненную мелкодисперсными частицами неподвижной фазы; компоненты разделяются в соответствии с их различным распределением между фазами и элюируются в характерные времена удерживания. Детекторы, такие как ультрафиолетовые или диодно-матричные, масс-спектрометрические или испарительные светорассеивающие устройства, регистрируют элюируемые пики, создавая как профиль-«отпечаток», так и, путем калибровки по эталонным стандартам, количественное содержание маркерных компонентов. Сочетание качественного «отпечатка» с количественным анализом — часто интерпретируемое с помощью хемометрических методов — обеспечивает мощную основу для контроля идентичности, консистентности и содержания растительного сырья (xie-2006, liang-2010, who-2011-qc).

Clinical relevance

ВЭЖХ поддерживает проверку идентичности и точное измерение маркерных или активных компонентов в растительном сырье, что является центральным для документирования консистентности и качества партии. Эта статья описывает аналитический метод и не является основанием для принятия индивидуальных решений о лечении.

Evidence & guidelines

Руководства ВОЗ по контролю качества и фармакопейные монографии используют ВЭЖХ для идентификации и количественного анализа растительного сырья, а обзоры хроматографического «отпечатка» устанавливают ВЭЖХ, часто с хемометрией, как ведущий подход к оценке качества растительного сырья (who-2011-qc, xie-2006, liang-2010, evans-2009).

History

Высокоэффективная жидкостная хроматография развилась из классической колоночной хроматографии в конце двадцатого века и стала доминирующим количественным методом разделения в фармацевтическом анализе; ее применение для снятия «отпечатков» и количественного определения маркеров сделало ее краеугольным камнем стандартизации растительных лекарственных средств, все чаще в сочетании с масс-спектрометрией и хемометрическим анализом данных (xie-2006, liang-2010, evans-2009).

Seminal works

• xie-2006
• liang-2010

Frequently asked questions

Почему ВЭЖХ предпочтительна для количественной стандартизации?

Поскольку она разделяет компоненты на колонке с чувствительными детекторами и может быть откалибрована по эталонным стандартам, она точно измеряет содержание маркерных или активных соединений, чего не могут более простые качественные методы.

Что такое ВЭЖХ-«отпечаток»?

Это характерный профиль пиков в определенных временах удерживания, полученный из экстракта; сравнение этого профиля с эталонным помогает подтвердить идентичность и консистентность и может быть проанализировано с помощью хемометрических методов.