Validação de Testes e Avaliação de Desempenho

A validação de testes e a avaliação de desempenho constituem o conjunto de trabalhos pelos quais um teste molecular demonstra medir o que se propõe, de forma reprodutível, e apoiar o uso clínico para o qual é destinado. Este processo distingue a validação analítica (o ensaio mede o analito corretamente?) da validação clínica (o resultado reflete o estado clínico?) e quantifica o desempenho com métricas como exatidão, precisão, sensibilidade, especificidade e limites de detecção.

Definition

A validação de testes é o processo documentado de demonstrar, por meio de experimentos sistemáticos, que um teste laboratorial funciona de forma precisa e reprodutível e é adequado para seu propósito clínico pretendido; a avaliação de desempenho é a medição e verificação contínuas dessas características.

Scope

Esta entrada abrange os conceitos e métricas utilizados para estabelecer e documentar o desempenho de testes moleculares antes do uso clínico e para verificá-lo posteriormente: validade analítica versus clínica, as características de desempenho padrão e as considerações especiais para ensaios de alta complexidade e seus pipelines bioinformáticos. É um tópico metodológico e não fornece instruções para diagnosticar ou tratar pacientes.

Core questions

• Qual é a diferença entre validade analítica e clínica?
• Quais características de desempenho devem ser estabelecidas para um teste molecular?
• Como são determinados os limites de detecção e quantificação?
• Como são validados o sequenciamento e o pipeline bioinformático, e não apenas o ensaio laboratorial?

Key concepts

• Validade analítica
• Validade clínica
• Exatidão e veracidade
• Precisão (repetibilidade e reprodutibilidade)
• Sensibilidade analítica e limite de detecção
• Especificidade analítica
• Faixa reportável e mensurável
• Validação de pipeline bioinformático
• Adequação ao uso pretendido

Mechanisms

A validação prossegue por meio de experimentos planejados utilizando amostras caracterizadas. A exatidão é avaliada por comparação com um método de referência ou espécimes conhecidos; a precisão por medições repetidas sob condições de repetibilidade e reprodutibilidade; a sensibilidade analítica pela determinação do limite de detecção; e a especificidade analítica pelo teste de interferências e reatividade cruzada (Jennings et al., 2009). Ensaios moleculares quantitativos podem ser validados com o mesmo arcabouço de química clínica usado para outros mensurandos, como demonstrado para ensaios de biópsia líquida por PCR digital em gotas (Milosevic et al., 2018). Para o sequenciamento de nova geração, o pipeline computacional que identifica e filtra variantes deve ser validado juntamente com as etapas laboratoriais (Roy et al., 2018). A validade clínica, distinta destas, questiona quão bem o resultado classifica a condição clínica.

Clinical relevance

A confiabilidade de um resultado molecular no cuidado ao paciente depende do trabalho de validação e desempenho que o sustenta; características de desempenho indocumentadas ou fracas comprometem a interpretação. Esta entrada explica como os laboratórios estabelecem essa confiança e não é um guia para solicitar ou agir com base em testes específicos.

Evidence & guidelines

A prática de validação é codificada em diretrizes profissionais, incluindo os princípios AMP/CAP para validação de testes de patologia molecular e pipelines de sequenciamento (Jennings et al., 2009; Roy et al., 2018) e documentos de consenso CLSI (CLSI EP28). Estes fornecem os desenhos experimentais e critérios de aceitação que os laboratórios seguem sob acreditação.

History

À medida que os testes moleculares clínicos se expandiram, organizações profissionais adaptaram os princípios estabelecidos de validação em química clínica e medicina laboratorial para ensaios moleculares, e depois os estenderam ao sequenciamento massivamente paralelo e sua bioinformática, produzindo os padrões de validação em camadas utilizados atualmente (Jennings et al., 2009; Roy et al., 2018).

Debates

Como a validação deve escalar para ensaios de alta complexidade e múltiplos alvos?

Estabelecer o desempenho para cada variante possível detectável por painéis de sequenciamento amplos é impraticável, então as diretrizes dependem de validação representativa e validação de pipeline; o quanto é suficiente permanece uma discussão ativa.

Seminal works

• jennings-2009
• roy-2018

Frequently asked questions

Qual é a diferença entre validade analítica e validade clínica?

A validade analítica refere-se a se o ensaio mede o analito de forma precisa e reprodutível; a validade clínica refere-se a se o resultado corresponde de fato à condição clínica que o teste se destina a detectar.

Por que o sequenciamento de nova geração precisa de validação de pipeline?

Como as variantes reportadas dependem do software que alinha as leituras e identifica as variantes, o pipeline bioinformático pode introduzir erros e deve ser validado juntamente com o procedimento laboratorial.