Fixation et coloration des prélèvements
La fixation et la coloration sont les deux étapes chimiques qui transforment un échantillon cytologique déposé en une lame interprétable. La fixation stabilise les cellules et préserve leur structure interne ; la coloration confère ensuite les couleurs et le contraste qui permettent au cytopathologiste de distinguer le noyau du cytoplasme et de lire les détails de la chromatine. L'association de la méthode de fixation et de la coloration est un choix délibéré qui détermine les caractéristiques cellulaires mises en évidence.
Definition
La fixation et la coloration des prélèvements sont les étapes préparatoires qui préservent la morphologie cellulaire (fixation) et confèrent une couleur sélective aux composants cellulaires (coloration) afin qu'une lame cytologique puisse être lue au microscope.
Scope
Cet article explique pourquoi et comment les prélèvements cytologiques sont fixés (fixation humide versus séchage à l'air délibéré), les principes des principales colorations cytologiques, et comment la combinaison fixation-coloration est adaptée à la question diagnostique. Il s'agit d'une référence méthodologique et ne fournit aucune instruction spécifique au patient.
Key concepts
- Fixation à l'alcool coagulant et fixation humide
- Séchage à l'air délibéré comme état préparatoire
- Coloration nucléaire versus cytoplasmique
- La coloration de Papanicolaou (transparente, polychrome)
- Colorations de Romanowsky pour les frottis séchés à l'air
- Artefact de séchage et son effet sur les détails nucléaires
- Montage, éclaircissement et permanence des lames
Mechanisms
La fixation arrête l'autolyse et immobilise les protéines cellulaires et les acides nucléiques. En cytologie, le fixateur dominant est l'éthanol ou un spray à base d'alcool appliqué tant que le frottis est encore humide (fixation humide), ce qui préserve la chromatine nucléaire fine nécessaire à la coloration de Papanicolaou. Alternativement, un frottis est laissé sécher à l'air, un état qui aplatit et agrandit les cellules et constitue la préparation requise pour les colorations de Romanowsky. La coloration exploite ensuite l'affinité des colorants chargés pour les composants cellulaires : les colorants basiques (cationiques) se lient à la chromatine nucléaire acide, tandis que les colorants acides (anioniques) colorent les protéines cytoplasmiques. La coloration de Papanicolaou combine une hématoxyline nucléaire avec plusieurs contre-colorations pour donner des cellules transparentes et polychromes ; les colorations de Romanowsky combinent des colorants azur et éosine dont l'interaction produit la chromatine pourpre caractéristique et les couleurs métachromatiques (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982; Koss & Melamed 2006).
Clinical relevance
Étant donné que la fixation et la coloration déterminent la visibilité des caractéristiques mêmes utilisées pour classer les cellules, elles sont indissociables du diagnostic et du compte rendu cytologiques. Cet article décrit les méthodes et leur justification comme base pour comprendre la pratique de laboratoire ; il ne constitue pas une base pour les décisions cliniques individuelles.
Evidence & guidelines
La littérature méthodologique établit les rôles complémentaires des deux grandes familles de colorations – la coloration de Papanicolaou fixée à l'alcool pour les détails nucléaires et de la chromatine, et les colorations de Romanowsky séchées à l'air pour les caractéristiques cytoplasmiques et de fond – et le travail de normalisation de Wittekind a défini une combinaison azur B-éosine Y comme coloration de référence Romanowsky-Giemsa (Wittekind 1982; Bibbo & Wilbur 2014). Les textes de référence soulignent que le moment et la qualité de la fixation sont les principaux déterminants contrôlables du résultat de la coloration et des artefacts tels que la distorsion nucléaire induite par le séchage (Koss & Melamed 2006).
History
La coloration cytologique est née de l'histochimie du XIXe siècle et des colorations hématologiques de Romanowsky et Giemsa, puis a été transformée pour la cytologie exfoliative par la coloration polychrome et transparente de Papanicolaou pour les frottis fixés à l'humide dans les années 1940. Les travaux ultérieurs du XXe siècle, y compris les études de normalisation des colorants de Wittekind, ont cherché à rendre la coloration de Romanowsky reproductible entre les laboratoires (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982).
Key figures
- George Papanicolaou
- Dietrich Wittekind
Related topics
Seminal works
- papanicolaou-1942
- wittekind-1982
- koss-melamed-2006
Frequently asked questions
- Pourquoi certains frottis cytologiques doivent-ils être fixés tant qu'ils sont encore humides ?
- La fixation humide (à l'alcool) préserve les détails fins de la chromatine nucléaire dont dépend la coloration de Papanicolaou. Si un tel frottis sèche avant la fixation, l'artefact de séchage déforme les noyaux et dégrade l'interprétation.
- Qu'est-ce qui détermine la coloration qu'un prélèvement cytologique reçoit ?
- Cela est déterminé par l'état de fixation et la question diagnostique : les frottis fixés à l'humide reçoivent la coloration de Papanicolaou pour les détails nucléaires, tandis que les frottis délibérément séchés à l'air reçoivent une coloration de Romanowsky qui met en évidence les caractéristiques cytoplasmiques et de fond.