Chromatographie liquide à haute performance

La chromatographie liquide à haute performance (CLHP) permet de séparer les constituants d'un extrait végétal sur une colonne garnie sous haute pression, à l'aide de détecteurs qui permettent à la fois d'obtenir des profils d'empreintes caractéristiques et une quantification précise des composés marqueurs. Il s'agit de la principale méthode instrumentale pour la standardisation quantitative des matières premières végétales et d'un outil central dans le contrôle qualité pharmacognostique moderne.

Definition

La chromatographie liquide à haute performance est une technique de séparation sur colonne dans laquelle une phase mobile liquide transporte les composants de l'échantillon à travers une phase stationnaire garnie sous haute pression, les résolvant pour la détection afin qu'ils puissent être identifiés par leur temps de rétention et leur profil, et quantifiés par rapport à des étalons de référence.

Scope

Cette entrée aborde le principe de la chromatographie liquide sur colonne, l'utilisation de la CLHP pour l'établissement d'empreintes chromatographiques et pour le dosage quantitatif des constituants marqueurs dans les drogues brutes et les extraits, ainsi que sa place parmi les méthodes chromatographiques de contrôle qualité. Il s'agit d'une référence méthodologique et non d'une directive clinique.

Core questions

• Le profil CLHP d'un échantillon correspond-il à l'empreinte de référence pour le matériau déclaré ?
• Quelle est la teneur quantifiée en constituants marqueurs ou actifs par rapport aux spécifications ?
• Le chromatogramme révèle-t-il une adultération, une substitution ou des constituants hors limites ?

Key concepts

• Chromatographie liquide sur colonne sous haute pression
• Phases stationnaire et mobile ; séparation en phase inverse
• Temps de rétention et résolution
• Détecteurs (UV/DAD, SM, ELSD)
• Dosage quantitatif par rapport à des étalons de référence
• Empreintes CLHP et composés marqueurs
• Analyse chimiométrique des empreintes

Mechanisms

Une pompe propulse une phase mobile liquide transportant l'échantillon dissous à travers une colonne garnie de fines particules de phase stationnaire ; les constituants se séparent en fonction de leurs différentes affinités entre les phases et éluent à des temps de rétention caractéristiques. Des détecteurs tels que les dispositifs à ultraviolet ou à barrette de diodes, spectrométriques de masse ou à diffusion de lumière par évaporation, enregistrent les pics d'élution, produisant à la fois un profil d'empreinte et, par étalonnage par rapport à des étalons de référence, la teneur quantitative en constituants marqueurs. La combinaison de l'empreinte qualitative avec le dosage quantitatif — souvent interprétée à l'aide de techniques chimiométriques — constitue une base solide pour le contrôle de l'identité, de la cohérence et de la teneur des matières premières végétales (xie-2006, liang-2010, who-2011-qc).

Clinical relevance

La CLHP soutient la vérification de l'identité et la mesure précise des constituants marqueurs ou actifs dans les matières premières végétales, ce qui est essentiel pour documenter la cohérence et la qualité des lots. Cette entrée décrit une méthode analytique et ne constitue pas une base pour des décisions de traitement individuelles.

Evidence & guidelines

Les directives de contrôle qualité de l'OMS et les monographies pharmacopéiques utilisent la CLHP pour l'identification et le dosage quantitatif des matières premières végétales, et les revues sur les empreintes chromatographiques établissent la CLHP, souvent associée à la chimiométrie, comme une approche prépondérante pour l'évaluation de la qualité des produits à base de plantes (who-2011-qc, xie-2006, liang-2010, evans-2009).

History

La chromatographie liquide à haute performance s'est développée à partir de la chromatographie sur colonne classique à la fin du XXe siècle et est devenue la méthode de séparation quantitative dominante en analyse pharmaceutique ; son application à l'établissement d'empreintes et à la quantification des marqueurs en a fait une pierre angulaire de la standardisation des médicaments à base de plantes, étant de plus en plus couplée à la spectrométrie de masse et à l'analyse de données chimiométriques (xie-2006, liang-2010, evans-2009).

Seminal works

• xie-2006
• liang-2010

Frequently asked questions

Pourquoi la CLHP est-elle privilégiée pour la standardisation quantitative ?

Parce qu'elle permet de séparer les constituants sur une colonne avec des détecteurs sensibles et peut être étalonnée par rapport à des étalons de référence, elle mesure avec précision la teneur en composés marqueurs ou actifs, ce que des méthodes qualitatives plus simples ne peuvent pas faire.

Qu'est-ce qu'une empreinte CLHP ?

C'est le profil caractéristique des pics à des temps de rétention définis produit par un extrait ; la comparaison de ce profil avec une référence aide à confirmer l'identité et la cohérence et peut être analysée à l'aide de techniques chimiométriques.