Detección fenotípica de patrones de resistencia comunes

La detección fenotípica de patrones de resistencia utiliza pruebas bioquímicas y basadas en el crecimiento para reconocer mecanismos de resistencia específicos y clínicamente importantes expresados por un organismo, más allá de simplemente categorizarlo como susceptible o resistente. Ejemplos clásicos incluyen la detección de betalactamasas de espectro extendido (BLEE), carbapenemasas y resistencia a la meticilina en estafilococos.

Definition

La detección de resistencia fenotípica es el uso de ensayos basados en el crecimiento, de sinergia o bioquímicos para demostrar que un organismo expresa un mecanismo de resistencia particular, como la producción de una betalactamasa o carbapenemasa específica, distinguiendo el mecanismo en lugar de solo la categoría de susceptibilidad.

Scope

Esta entrada cubre las principales estrategias fenotípicas para confirmar patrones de resistencia comunes: pruebas de sinergia de doble disco y de disco combinado para BLEE, pruebas bioquímicas y basadas en el crecimiento de carbapenemasas como el Carba NP y los métodos de inactivación de carbapenémicos, y la detección basada en cefoxitina para la resistencia a la meticilina. Explica lo que demuestran estas pruebas y sus límites, y es material de referencia en lugar de una guía de tratamiento.

Core questions

• ¿Este organismo expresa un mecanismo de resistencia específico como una BLEE o carbapenemasa?
• ¿Qué pruebas fenotípicas pueden confirmar ese mecanismo y qué significan sus resultados?
• ¿Cuáles son las limitaciones de la detección fenotípica en comparación con la confirmación molecular?

Key concepts

• Detección de betalactamasa de espectro extendido (BLEE)
• Pruebas de sinergia de doble disco y de disco combinado
• Detección de carbapenemasa (Carba NP, método de inactivación de carbapenémicos)
• Detección de cefoxitina para la resistencia a la meticilina
• Resistencia inducible a clindamicina (prueba D)
• Pruebas confirmatorias versus de cribado
• Discordancia fenotipo-genotipo

Mechanisms

Las pruebas fenotípicas revelan un mecanismo de resistencia a través de su efecto funcional. La detección de BLEE se basa en la restauración de la susceptibilidad a una cefalosporina indicadora cuando se añade un inhibidor de betalactamasa (como el ácido clavulánico), lo que se observa como sinergia en formatos de doble disco o disco combinado (paterson-2005). La actividad de carbapenemasa se puede detectar bioquímicamente mediante la hidrólisis de un carbapenémico, como en la prueba colorimétrica Carba NP, o mediante ensayos basados en el crecimiento como el método de inactivación de carbapenémicos, en el que un disco de carbapenémico expuesto al organismo de prueba pierde su capacidad para inhibir una cepa indicadora susceptible (van-der-zwaluw-2015; nordmann-2009). La resistencia a la meticilina en estafilococos se detecta fenotípicamente utilizando cefoxitina, un sustituto que induce y detecta mejor la resistencia mediada por mecA, y la resistencia inducible a macrólidos-lincosamidas se demuestra mediante la prueba D. Las reglas expertas ayudan a interpretar estos patrones y a señalar resultados inconsistentes (leclercq-2013; clsi-m100).

Clinical relevance

El reconocimiento de fenotipos de resistencia como la producción de BLEE o carbapenemasa es fundamental para el control de infecciones, la vigilancia y la administración de antimicrobianos, ya que estos mecanismos afectan a clases enteras de agentes. Esta entrada describe cómo se demuestran dichos fenotipos en el laboratorio como conocimiento de referencia y no proporciona orientación diagnóstica o de prescripción individual.

Epidemiology

Las Enterobacterales productoras de carbapenemasas y las productoras de BLEE se han extendido internacionalmente, lo que hace que su detección fenotípica sea una prioridad para los laboratorios y las redes de vigilancia; la epidemiología de estos mecanismos ha moldeado el desarrollo y la adopción de pruebas confirmatorias (nordmann-2009; paterson-2005).

History

A medida que los mecanismos de resistencia a los betalactámicos se diversificaron a partir de la década de 1980, los laboratorios desarrollaron pruebas confirmatorias fenotípicas, comenzando con la detección de BLEE basada en inhibidores. La aparición internacional de organismos productores de carbapenemasas en la década de 2000 impulsó ensayos rápidos bioquímicos y basados en el crecimiento de carbapenemasas, como la prueba Carba NP y, posteriormente, el método más simple de inactivación de carbapenémicos (paterson-2005; nordmann-2009; van-der-zwaluw-2015).

Debates

Confirmación fenotípica versus molecular

Las pruebas fenotípicas detectan la actividad funcional pero pueden no identificar el gen específico, mientras que las pruebas moleculares identifican genes que no siempre se expresan; se debate la combinación y secuencia apropiadas de métodos para confirmar mecanismos como la producción de carbapenemasa.

Sensibilidad para mecanismos débilmente expresados

Algunos mecanismos de resistencia se expresan a niveles bajos o solo bajo inducción, por lo que el cribado fenotípico puede pasarlos por alto, lo que plantea preguntas sobre qué estrategia confirmatoria proporciona una sensibilidad adecuada.

Seminal works

• paterson-2005
• nordmann-2009
• van-der-zwaluw-2015

Frequently asked questions

¿Qué muestra una prueba confirmatoria de BLEE?

Demuestra que la adición de un inhibidor de betalactamasa restaura la susceptibilidad del organismo a una cefalosporina indicadora, lo que indica la producción de una betalactamasa de espectro extendido; muestra el mecanismo funcional en lugar de nombrar la enzima específica.

¿Por qué detectar carbapenemasas fenotípicamente cuando existen pruebas moleculares?

Las pruebas fenotípicas, como el método de inactivación de carbapenémicos, son económicas y detectan la actividad funcional de hidrólisis de carbapenémicos independientemente del gen específico, complementando las pruebas moleculares que se dirigen a genes conocidos pero pueden pasar por alto los nuevos.