Cultivo y Aislamiento de Hongos

El cultivo de hongos es la práctica de cultivar estos microorganismos a partir de una muestra de paciente en medios artificiales, con el fin de recuperar, examinar, identificar y probar un organismo viable. A pesar de tener un tiempo de respuesta más lento que los métodos de detección directa, el cultivo se mantiene como un estándar de referencia, ya que permite obtener un aislado vivo para la identificación definitiva de la especie y la realización de pruebas de susceptibilidad a los antifúngicos.

Definition

El cultivo y aislamiento de hongos es el conjunto de técnicas de laboratorio que permiten recuperar hongos viables de material clínico mediante la inoculación de medios selectivos o enriquecidos bajo condiciones que favorecen el crecimiento fúngico, obteniendo así un aislado puro para su posterior identificación y prueba.

Scope

Este tema abarca los principios de la recuperación de hongos a partir de muestras clínicas: medios selectivos y enriquecidos, condiciones de incubación, la distinción entre levaduras y mohos en cultivo, y cómo un aislado puro facilita la identificación por morfología, espectrometría de masas o secuenciación. Se considera el cultivo como un método de laboratorio y no se proporcionan protocolos de recolección de muestras ni guías de tratamiento.

Core questions

• ¿Qué medios y condiciones de incubación permiten recuperar mejor el hongo sospechado en una muestra determinada?
• ¿Cómo se distingue un aislado clínicamente significativo de la contaminación ambiental?
• ¿Cuándo una identificación basada en cultivo requiere confirmación por secuenciación o espectrometría de masas?
• ¿Cuáles son los límites de la sensibilidad del cultivo en la enfermedad fúngica invasiva?

Key concepts

• Medios selectivos y enriquecidos (p. ej., agar Sabouraud)
• Crecimiento de levaduras frente a mohos
• Temperatura y tiempo de incubación
• Aislado puro y subcultivo
• Contaminación frente a patógeno verdadero
• Cultivo como sustrato para pruebas de susceptibilidad
• Identificación polifásica del aislado

Mechanisms

Las muestras se inoculan en medios formulados para favorecer el crecimiento fúngico mientras se suprimen las bacterias competidoras, clásicamente agar dextrosa de Sabouraud, a veces con aditivos antibacterianos o selectivos. Las placas y tubos inclinados se incuban, a menudo durante períodos prolongados debido a que muchos hongos crecen lentamente, y a temperaturas elegidas para revelar dimorfismo o termotolerancia. Luego se evalúa el crecimiento: las levaduras forman colonias pastosas, mientras que los mohos producen colonias filamentosas, a menudo pigmentadas, cuya morfología macroscópica y microscópica guía la identificación. El aislado puro que proporciona el cultivo es el sustrato sobre el cual las especies se confirman por morfología, espectrometría de masas MALDI-TOF o secuenciación de ADN, y sobre el cual se mide la susceptibilidad a los antifúngicos. Debido a que los organismos viables pueden ser escasos, el cultivo puede ser insensible en infecciones profundas o tratadas, razón por la cual se interpreta junto con métodos directos y moleculares.

Clinical relevance

El cultivo es la base de gran parte de cómo se confirman y nombran los patógenos fúngicos, y un cultivo positivo de un sitio normalmente estéril tiene un peso diagnóstico particular dentro de las definiciones de consenso de enfermedad fúngica invasiva. Esta entrada describe el método y su valor interpretativo; es material de referencia sobre cómo se obtienen los aislados y no es una guía para el manejo de muestras o la gestión del paciente.

Evidence & guidelines

Las recomendaciones de mejores prácticas de la British Society for Medical Mycology y las definiciones de consenso EORTC/MSGERC describen el papel del cultivo entre los métodos diagnósticos, incluyendo su peso cuando se recuperan hongos de sitios estériles y su conocida insensibilidad en algunas infecciones invasivas. Los atlas de referencia catalogan la morfología de la colonia y microscópica utilizada para identificar los aislados.

History

El cultivo en medios definidos fue la herramienta fundamental de la micología médica, con el agar dextrosa de Sabouraud, introducido a principios del siglo XX, convirtiéndose en el sustrato estándar para recuperar e identificar hongos. Durante la mayor parte del siglo, la identificación se basó en la morfología de la colonia y microscópica obtenida del cultivo, y solo más tarde la espectrometría de masas y la secuenciación añadieron precisión a la identificación del aislado cultivado.

Seminal works

• schelenz-2015
• dehoog-2020

Frequently asked questions

¿Por qué el cultivo de hongos a menudo tarda tanto?

Muchos mohos de importancia médica y algunas levaduras crecen lentamente, por lo que los cultivos pueden mantenerse durante días o semanas para permitir un crecimiento visible y una identificación fiable, razón por la cual se utilizan métodos directos y moleculares más rápidos junto con el cultivo.

¿Un cultivo fúngico positivo siempre significa infección?

No necesariamente. Los hongos son comunes en el ambiente y en las superficies corporales, por lo que un cultivo positivo debe interpretarse en contexto; la recuperación de un sitio normalmente estéril es mucho más significativa que la de una muestra contaminada o colonizada.