Citoquímica y Citometría de Flujo en Leucemia

La citoquímica y la citometría de flujo son las técnicas de laboratorio que transforman un diagnóstico de leucemia de una impresión morfológica a un linaje e inmunofenotipo definidos. Las tinciones citoquímicas revelan propiedades enzimáticas y metabólicas de las células leucémicas, mientras que la citometría de flujo multiparamétrica mide simultáneamente muchos marcadores de superficie e intracelulares, asignando conjuntamente el linaje y detectando la enfermedad residual medible.

Definition

La citoquímica y la citometría de flujo son métodos de laboratorio para caracterizar células leucémicas: la citoquímica utiliza tinciones que revelan características enzimáticas o bioquímicas (por ejemplo, la actividad de la mieloperoxidasa), y la citometría de flujo multiparamétrica mide múltiples antígenos de superficie e intracelulares por célula para asignar el linaje, definir el inmunofenotipo y cuantificar la enfermedad residual.

Scope

Este tema abarca los métodos utilizados para caracterizar las células leucémicas más allá de la morfología: tinciones citoquímicas clásicas como la mieloperoxidasa, e inmunofenotipificación moderna por citometría de flujo multiparamétrica, incluyendo paneles de anticuerpos estandarizados y la detección de enfermedad residual medible (mínima). Es material de referencia sobre metodología de laboratorio, no un protocolo clínico.

Key concepts

• Mieloperoxidasa y otras tinciones citoquímicas
• Asignación de linaje por inmunofenotipo
• Citometría de flujo multiparamétrica (multicolor)
• Paneles de anticuerpos estandarizados
• Expresión aberrante de antígenos
• Gating y análisis de poblaciones
• Detección de enfermedad residual medible (mínima)

Mechanisms

Las tinciones citoquímicas explotan enzimas y componentes celulares específicos: la actividad de la mieloperoxidasa, por ejemplo, marca el linaje mieloide y ayuda a separar la leucemia mieloide aguda de la leucemia linfoblástica aguda en un frotis teñido. La citometría de flujo suspende las células en una corriente que pasa por láseres y registra la dispersión de la luz y la fluorescencia de los marcadores unidos a anticuerpos, lo que permite medir muchos antígenos en cada célula; las combinaciones de antígenos características y aberrantes definen el linaje e identifican la población leucémica. El mismo enfoque, aplicado con alta sensibilidad y paneles estandarizados, detecta pequeñas poblaciones leucémicas residuales después del tratamiento como enfermedad residual medible (van Dongen et al., 2012; Schuurhuis et al., 2018).

Clinical relevance

Estas técnicas sustentan la asignación de linaje y la inmunofenotipificación de las que depende la clasificación moderna de la leucemia, y la evaluación citométrica de flujo de la enfermedad residual medible se ha convertido en un marcador de respuesta importante en la literatura. Esta entrada describe los métodos a nivel de referencia y no constituye una guía para interpretar los resultados de un paciente individual.

Evidence & guidelines

Los esfuerzos de estandarización, como los paneles de anticuerpos EuroFlow, definen una inmunofenotipificación citométrica de flujo reproducible, y el Grupo de Trabajo de MRD de la European LeukemiaNet proporciona criterios de consenso para la evaluación de la enfermedad residual medible en la leucemia mieloide aguda; los criterios de linaje también están incorporados en la clasificación de la OMS (van Dongen et al., 2012; Schuurhuis et al., 2018; Arber et al., 2016).

History

La tinción citoquímica fue el medio original para refinar el diagnóstico morfológico de la leucemia aguda y asignar el linaje. La inmunofenotipificación por citometría de flujo suplantó en gran medida la citoquímica para la asignación de linaje al medir muchos antígenos por célula, y las iniciativas de estandarización y los documentos de consenso sobre enfermedad residual medible extendieron posteriormente su papel a una evaluación reproducible y de alta sensibilidad (van Dongen et al., 2012; Schuurhuis et al., 2018).

Seminal works

• van-dongen-2012
• schuurhuis-2018

Frequently asked questions

¿Por qué es útil la tinción de mieloperoxidasa en la leucemia aguda?

La mieloperoxidasa es un marcador del linaje mieloide, por lo que su presencia en una tinción citoquímica apoya un diagnóstico de leucemia mieloide aguda y ayuda a distinguirla de la leucemia linfoblástica aguda.

¿Qué es la detección de enfermedad residual medible por citometría de flujo?

Es el uso de citometría de flujo multiparamétrica de alta sensibilidad para detectar pequeñas poblaciones de células leucémicas que persisten después del tratamiento, por debajo del nivel visible en la morfología de rutina, como un marcador de respuesta.