زراعة الفطريات وعزلها
زراعة الفطريات هي ممارسة تنمية الفطريات من عينة مريض على أوساط اصطناعية بحيث يمكن استعادة كائن حي قابل للحياة وفحصه وتحديده واختباره. على الرغم من أن وقت الاستجابة أبطأ من طرق الكشف المباشر، إلا أن الزراعة تظل معيارًا مرجعيًا لأنها تنتج عزلًا حيًا لتحديد الأنواع بشكل قاطع واختبار الحساسية لمضادات الفطريات.
Definition
زراعة الفطريات وعزلها هي مجموعة من التقنيات المخبرية التي تستعيد الفطريات القابلة للحياة من المواد السريرية عن طريق تلقيح أوساط انتقائية أو مُثرية تحت ظروف تفضل نمو الفطريات، مما ينتج عنه عزل نقي لمزيد من التحديد والاختبار.
Scope
يغطي هذا الموضوع مبادئ استعادة الفطريات من العينات السريرية: الأوساط الانتقائية والمُثرية، وظروف الحضانة، والتمييز بين الخمائر والعفن في المزرعة، وكيف يدعم العزل النقي التحديد عن طريق الشكل الظاهري، أو مطياف الكتلة، أو التسلسل. إنه يتعامل مع الزراعة كطريقة مخبرية ولا يقدم بروتوكولات جمع العينات أو إرشادات العلاج.
Core questions
- ما هي الأوساط وظروف الحضانة الأفضل لاستعادة الفطر المشتبه به في عينة معينة؟
- كيف يتم تمييز العزل ذي الأهمية السريرية عن التلوث البيئي؟
- متى يتطلب التحديد القائم على الزراعة تأكيدًا عن طريق التسلسل أو مطياف الكتلة؟
- ما هي حدود حساسية الزراعة في الأمراض الفطرية الغازية؟
Key concepts
- الأوساط الانتقائية والمُثرية (مثل أجار سابورو)
- نمو الخميرة مقابل العفن
- درجة حرارة ووقت الحضانة
- العزل النقي والزراعة الفرعية
- التلوث مقابل الممرض الحقيقي
- الزراعة كركيزة لاختبار الحساسية
- التحديد متعدد الأطوار للعزل
Mechanisms
تُلقح العينات على أوساط مُصممة لدعم نمو الفطريات مع تثبيط البكتيريا المتنافسة، وعادةً ما يكون ذلك على أجار سابورو دكستروز، وأحيانًا مع إضافات مضادة للبكتيريا أو انتقائية. تُحضن الأطباق والأنابيب المائلة، غالبًا لفترات طويلة لأن العديد من الفطريات تنمو ببطء، وفي درجات حرارة مختارة للكشف عن التثنائي أو تحمل الحرارة. ثم يُقيّم النمو: تشكل الخمائر مستعمرات عجينية، بينما تنتج الأعفان مستعمرات خيطية، غالبًا ما تكون مصبوغة، والتي توجه مورفولوجيتها العيانية والمجهرية عملية التحديد. العزل النقي الذي توفره الزراعة هو الركيزة التي يتم عليها تأكيد الأنواع عن طريق الشكل الظاهري، أو مطياف الكتلة MALDI-TOF، أو تسلسل الحمض النووي، والتي تُقاس عليها حساسية مضادات الفطريات. نظرًا لأن الكائنات الحية القابلة للحياة قد تكون نادرة، يمكن أن تكون الزراعة غير حساسة في الالتهابات العميقة أو المعالجة، ولهذا السبب تُفسر جنبًا إلى جنب مع الطرق المباشرة والجزيئية.
Clinical relevance
تُعد الزراعة أساسًا لكيفية تأكيد وتسمية مسببات الأمراض الفطرية، وتحمل الزراعة الإيجابية من موقع معقم عادةً وزنًا تشخيصيًا خاصًا ضمن التعريفات المتفق عليها للأمراض الفطرية الغازية. يصف هذا المدخل الطريقة وقيمتها التفسيرية؛ وهو مادة مرجعية حول كيفية الحصول على العزلات وليس دليلًا للتعامل مع العينات أو إدارة المرضى.
Evidence & guidelines
تصف توصيات أفضل الممارسات من الجمعية البريطانية لعلم الفطريات الطبية وتعريفات الإجماع EORTC/MSGERC دور الزراعة بين طرق التشخيص، بما في ذلك وزنها عند استعادة الفطريات من المواقع المعقمة وحساسيتها المعروفة في بعض الالتهابات الغازية. تُصنف الأطالس المرجعية مورفولوجيا المستعمرات والمورفولوجيا المجهرية المستخدمة لتحديد العزلات.
History
كانت الزراعة على أوساط محددة هي الأداة الأساسية لعلم الفطريات الطبية، حيث أصبح أجار سابورو دكستروز، الذي تم تقديمه في أوائل القرن العشرين، الركيزة القياسية لاستعادة وتحديد الفطريات. لمعظم القرن، اعتمد التحديد على مورفولوجيا المستعمرات والمورفولوجيا المجهرية المستقاة من الزراعة، وفي وقت لاحق فقط أضاف مطياف الكتلة والتسلسل دقة لتحديد العزل المزروع.
Related topics
Seminal works
- schelenz-2015
- dehoog-2020
Frequently asked questions
- لماذا تستغرق زراعة الفطريات وقتًا طويلاً غالبًا؟
- تنمو العديد من الأعفان المهمة طبيًا وبعض الخمائر ببطء، لذلك قد تُحتفظ المزارع لأيام إلى أسابيع للسماح بالنمو المرئي والتحديد الموثوق، وهذا أحد الأسباب التي تجعل الطرق المباشرة والجزيئية الأسرع تُستخدم جنبًا إلى جنب مع الزراعة.
- هل تعني زراعة الفطريات الإيجابية دائمًا الإصابة بالعدوى؟
- ليس بالضرورة. الفطريات شائعة في البيئة وعلى أسطح الجسم، لذلك يجب تفسير الزراعة الإيجابية في سياقها؛ فالاستعادة من موقع معقم عادةً أكثر أهمية بكثير من الاستعادة من عينة ملوثة أو مستعمرة.