الفحص المجهري وطرق الصبغ للفطريات

يتيح الفحص المجهري المباشر والصبغ للمختبر رؤية العناصر الفطرية في العينة دون انتظار المزرعة. تكشف المستحضرات الرطبة البسيطة، والمُفتحات الفلورية، وصبغات الأنسجة عن الخيوط الفطرية (hyphae)، والخمائر (yeasts)، والأبواغ (spores)، مما يوفر دليلاً سريعًا على وجود الفطريات، وفي الأنسجة، على غزوها.

Definition

طرق الفحص المجهري والصبغ للفطريات هي التقنيات التي تجعل التراكيب الفطرية مرئية في العينات السريرية أو مقاطع الأنسجة، باستخدام عوامل التنظيف، أو الروابط الفلورية لجدار الخلية، أو الصبغات الكيميائية النسيجية لعرض الخيوط الفطرية، والخمائر، والأبواغ تحت المجهر الضوئي أو الفلوري.

Scope

يغطي هذا الموضوع طرق تصور الفطريات: المستحضرات الرطبة بهيدروكسيد البوتاسيوم التي تنظف العينات، والصبغات الفلورية مثل الكالكوفلور الأبيض (calcofluor white) التي ترتبط بجدران الخلايا الفطرية، والصبغات النسيجية المستخدمة في مقاطع الأنسجة. كما يغطي ما يمكن وما لا يمكن أن تخبره المورفولوجيا للمراقب حول الهوية. هذا مرجع وصفي للطرق، وليس بروتوكولًا تشخيصيًا أو علاجيًا.

Core questions

• هل توجد عناصر فطرية في هذه العينة، وما هو الشكل المورفولوجي الذي تتخذه؟
• ما هي أفضل صبغة لإظهار الفطريات في مستحضر رطب مقابل مقطع نسيجي؟
• إلى أي مدى يمكن للمورفولوجيا وحدها أن تحدد هوية الفطر؟
• هل يظهر الفحص المجهري غزو الأنسجة بدلاً من الاستعمار السطحي؟

Key concepts

• مستحضر هيدروكسيد البوتاسيوم (KOH) الرطب
• صبغة الكالكوفلور الأبيض (Calcofluor white) الفلورية
• صبغة حمض البيريوديك-شيف (PAS)
• صبغة ميثينامين الفضة لغروكوت-غوموري (GMS)
• الخيوط الفطرية (Hyphae)، والخمائر (yeasts)، والخيوط الفطرية الكاذبة (pseudohyphae)
• غزو الأنسجة مقابل الاستعمار
• حدود التحديد المورفولوجي

Mechanisms

في مستحضر هيدروكسيد البوتاسيوم (KOH)، يذيب هيدروكسيد البوتاسيوم الكيراتين والمواد المضيفة الأخرى، تاركًا جدران الفطريات الانكسارية مرئية تحت المجهر. ترتبط المفتحات الفلورية مثل الكالكوفلور الأبيض بالكيتين والسليلوز في جدار الخلية الفطرية وتتفلور تحت الضوء فوق البنفسجي، مما يحدد بوضوح الخيوط الفطرية والخمائر على خلفية داكنة. في الأنسجة، تستغل الصبغات الخاصة الجدار الغني بالسكريات المتعددة: يبرز حمض البيريوديك-شيف (periodic acid-Schiff) جدران الفطريات باللون الأرجواني، ويرسب ميثينامين الفضة لغروكوت-غوموري (Grocott-Gomori methenamine silver) الفضة لجعلها سوداء، مما يسمح برؤية الفطريات داخل المقاطع، والأهم من ذلك، الحكم على أنها تغزو الأنسجة. تحدد المورفولوجيا، ونمط تفرع الخيوط الفطرية، ووجود الخمائر أو الخيوط الفطرية الكاذبة (pseudohyphae)، والتقسيم (septation)، التشخيص التفريقي ولكنها نادرًا ما تكون خاصة بالنوع، لذا يتم إقران الفحص المجهري بالمزرعة أو المستضد أو الطرق الجزيئية لتحديد الهوية بشكل قاطع.

Clinical relevance

يوفر الفحص المجهري بعضًا من أسرع الأدلة على وجود الفطريات، وفي الأنسجة، على أنها تغزو، وهو أمر أساسي لكيفية التعرف على الأمراض الفطرية الغازية. يشرح هذا المدخل الطرق وحدودها التفسيرية كمادة مرجعية؛ ولا يقدم تعليمات حول تحضير العينات أو إدارة المرضى.

Evidence & guidelines

توثق مراجعات علم الأنسجة المرضي الفطري (fungal histopathology) الصبغات المستخدمة لعرض الفطريات في الأنسجة والقرائن المورفولوجية، والحدود، لتحديد الكائنات الحية من خلال المظهر. توصي أفضل الممارسات لتشخيص الأمراض الفطرية الخطيرة بالفحص المجهري المباشر والصبغ الفلوري كطرق سريعة في الخط الأمامي تستخدم جنبًا إلى جنب مع المزرعة والاختبارات الجزيئية.

History

يعد الفحص المجهري المباشر من أقدم الطرق الفطرية، حيث استخدمت المستحضرات الرطبة بهيدروكسيد البوتاسيوم منذ فترة طويلة لإظهار الفطريات الجلدية (dermatophytes) والفطريات الأخرى. أصبحت الصبغات الكيميائية النسيجية مثل طرق ميثينامين الفضة لغروكوت-غوموري وحمض البيريوديك-شيف معيارًا في القرن العشرين لإظهار الفطريات في الأنسجة، وأضافت المفتحات الفلورية لاحقًا حساسية بجعل جدران الخلايا تتوهج تحت الضوء فوق البنفسجي.

Seminal works

• guarner-2011
• dehoog-2020

Frequently asked questions

هل يمكن للفحص المجهري تحديد النوع الفطري الدقيق؟

عادة لا. يمكن للفحص المجهري أن يظهر وجود الفطريات ويشير إلى فئات واسعة مثل الخمائر أو العفن، ولكن تحديد النوع الدقيق يتطلب عادة المزرعة، أو مطياف الكتلة (mass spectrometry)، أو تسلسل الحمض النووي (DNA sequencing).

لماذا يعتبر الكالكوفلور الأبيض مفيدًا لرؤية الفطريات؟

يرتبط الكالكوفلور الأبيض بمكونات جدار الخلية الفطرية ويتفلور تحت الضوء فوق البنفسجي، مما يجعل حتى الخيوط الفطرية والخمائر القليلة تبرز بوضوح، مما يحسن الكشف مقارنة بالمستحضر الرطب غير المصبوغ.