تشخيص الفطريات وطرق المختبر

تشخيص الفطريات هو التخصص المخبري الذي يكشف ويحدد ويميّز الفطريات المسببة للأمراض البشرية. ويشمل هذا التخصص الأساليب التقليدية مثل الزراعة الميكروبية والفحص المجهري، والفحوصات المناعية للمستضدات والأجسام المضادة، والتقنيات الجزيئية بما في ذلك تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وتسلسل الحمض النووي (DNA)، حيث يجمعها لتأكيد أو استبعاد العدوى الفطرية وتحديد الكائن الحي المسؤول.

Definition

تشخيص الفطريات وطرق المختبر هي التقنيات والإجراءات المستخدمة في المختبر السريري لاستعادة الفطريات ذات الأهمية الطبية وتصويرها وتحديدها وتمييزها بطرق أخرى من عينات المرضى، بما في ذلك المناهج النمطية الظاهرية والمناعية والجزيئية.

Scope

يوجه هذا المجال القارئ إلى العائلات الرئيسية لطرق المختبر المستخدمة في علم الفطريات الطبية: زراعة الفطريات في المزارع وعزلها، وفحصها وصبغها تحت المجهر، وتضخيم وتسلسل أحماضها النووية، والكشف عن مستضداتها والأجسام المضادة للمضيف، وقياس المؤشرات الحيوية والميزات المتعلقة بالأغشية الحيوية. ويصوغ هذه الأساليب كمنهجية تشخيصية بدلاً من كونها إرشادات علاجية، ويشير إلى العقد الموضوعية المخصصة للحصول على التفاصيل.

Sub-topics

• الكشف عن المستضدات والاختبارات المصلية
• المؤشرات الحيوية والأغشية الحيوية الفطرية في التشخيص
• زراعة الفطريات وعزلها
• الفحص المجهري وطرق الصبغ للفطريات
• التشخيص الجزيئي: تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) والتسلسل

Core questions

• هل توجد فطريات في هذه العينة، وهل هي ملوثة أم مسببة للمرض حقًا؟
• ما هو الجنس أو النوع المسؤول، وما مدى الثقة في تسميته؟
• ما هو أفضل مزيج من طرق الزراعة الميكروبية، والفحص المجهري، والمستضدات، والطرق الجزيئية الذي يتناسب مع السؤال السريري ونوع العينة؟
• كيف يتم تفسير النتائج المخبرية الإيجابية والسلبية ضمن التعريفات الموحدة للأمراض الفطرية الغازية؟

Key concepts

• التحديد النمطي الظاهري مقابل التحديد الجزيئي
• الكشف المباشر مقابل الاستعادة القائمة على الزراعة الميكروبية
• حساسية وخصوصية فحوصات الفطريات
• الأمراض الفطرية الغازية المؤكدة والمحتملة والممكنة
• جودة العينة والتحكم في التلوث
• التحديد متعدد الأوجه

Mechanisms

يجمع علم الفطريات المخبري إشارات متكاملة. تستعيد المزارع الكائنات الحية القابلة للحياة وتسمح بالتعرف المورفولوجي واختبار الحساسية، ولكنها غالبًا ما تكون بطيئة وغير حساسة للأمراض الغازية. يصور الفحص المجهري وعلم الأنسجة المرضي العناصر الفطرية مباشرة في العينات، مما يوفر دليلًا سريعًا على غزو الأنسجة. تكشف فحوصات المستضدات والفحوصات المصلية عن مكونات جدار الخلية الفطرية أو استجابات الأجسام المضادة للمضيف دون الحاجة إلى النمو. تضخم الطرق الجزيئية وتسلسل الحمض النووي المحفوظ أو الخاص بالأنواع، وتحدد مطيافية الكتلة البروتينات، مما يتيح تحديدًا سريعًا ودقيقًا. يعتمد التشخيص الحديث على نهج متعدد الأوجه، يدمج العديد من هذه الطرق، وتحدد التعريفات المتفق عليها كيفية دمج النتائج في فئات الأمراض الفطرية الغازية.

Clinical relevance

تولد الطرق المجمعة هنا الأدلة التي يتم على أساسها التعرف على العدوى الفطرية وتسميتها في الممارسة السريرية والبحث. يساعد فهم نقاط قوتها وقيودها في تقييم التقارير التشخيصية والأدلة البحثية. هذا المدخل هو مادة مرجعية وصفية حول كيفية إثبات تشخيصات الفطريات وليس بروتوكولًا للاختبار أو الوصف أو إدارة المرضى الأفراد.

Evidence & guidelines

توحد التعريفات المتفق عليها من قبل EORTC و Mycoses Study Group Education and Research Consortium كيفية دمج النتائج الفطرية والسريرية في فئات الأمراض الفطرية الغازية، مما يوفر إطارًا مشتركًا للتشخيص والبحث. تسرد النصوص المرجعية مثل أطلس الفطريات السريرية (Atlas of Clinical Fungi) السمات المورفولوجية المستخدمة في التحديد النمطي الظاهري، بينما توثق مراجعات علم الأنسجة المرضي ومطيافية الكتلة دور طرق التحديد الأحدث.

History

نما تشخيص الفطريات من زراعة الميكروبات والفحص المجهري في القرنين التاسع عشر والعشرين، حيث تم استعادة الفطريات على أوساط انتقائية وتحديدها بواسطة المستعمرة والمورفولوجيا المجهرية. أضاف أواخر القرن العشرين الفحوصات المناعية للمستضدات الفطرية والأجسام المضادة للمضيف، وقد أدى ظهور تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، وتسلسل الحمض النووي للمناطق الريبوسومية، ومطيافية الكتلة MALDI-TOF إلى تحويل التحديد نحو الدقة الجزيئية والبروتينية، بينما وحدت التعريفات المتفق عليها التفسير.

Seminal works

• donnelly-2020
• guarner-2011
• dehoog-2020

Frequently asked questions

لماذا تُستخدم عدة طرق مختلفة لتشخيص العدوى الفطرية؟

لا توجد طريقة واحدة سريعة وموثوقة في كل الحالات. فكل من الزراعة الميكروبية، والفحص المجهري، وفحوصات المستضدات، والاختبارات الجزيئية يكشف جانبًا مختلفًا من الفطر، لذا فإن دمجها يحسن فرصة التشخيص الصحيح وفي الوقت المناسب.

ما الفرق بين الكشف عن الفطر وتحديده؟

الكشف يثبت وجود الفطر، على سبيل المثال عن طريق رؤية العناصر الفطرية أو الكشف عن مستضد. أما التحديد فيسمي الجنس أو النوع، وهذا يتطلب عادةً مورفولوجيا الزراعة الميكروبية، أو التسلسل، أو مطيافية الكتلة.