高效液相色谱法

高效液相色谱法通过在高压下将液体流动相泵入装有细小填料的色谱柱中，分离非挥发性和热不稳定化合物。

Definition

高效液相色谱法是一种分离技术，其中液体流动相在高压下通过填充有细小固定相颗粒的色谱柱，通过分析物与两相的差异相互作用进行分离。

Scope

本主题涵盖高效液相色谱法：包括泵和梯度系统、填充有微小多孔颗粒的色谱柱、主要的几种分离模式——反相、正相、离子交换和尺寸排阻，以及检测器，如紫外、二极管阵列、荧光和质谱检测器。它涉及方法开发、流动相组成在选择性中的作用，以及通过峰面积进行定量。

Core questions

• 反相和离子交换等分离模式在保留机制上有何不同？
• 流动相组成（包括梯度洗脱）如何控制选择性和运行时间？
• 为什么更小的固定相颗粒能提高效率，代价是什么？
• 如何根据灵敏度、选择性和鉴定需求选择HPLC检测器？

Key theories

反相保留

在占主导地位的反相模式中，非极性固定相根据分析物在极性水-有机流动相中的疏水性程度保留分析物；增加有机相比例会降低保留，从而实现对有机化合物的可调谐、广泛适用的分离。

Mechanisms

高压泵驱动液体流动相通过填充有多孔颗粒并带有键合固定相的色谱柱。注入流路中的样品会根据其化学性质在流动相和固定相之间分配，从而实现分离；在运行过程中改变流动相组成（梯度洗脱）可以使分离更尖锐、更快速。洗脱出的分析物通过检测器，其峰面积可根据校准标准进行定量。

Clinical relevance

高效液相色谱法是药物分析和杂质谱分析、治疗药物和代谢物测量、食品和天然产物分析以及生物分子表征的主要方法，也是液相色谱-质谱联用的主要前端技术。

History

现代液相色谱法出现于20世纪60年代末和70年代，当时泵、细颗粒填料和灵敏检测器的发展使得在高压下进行液体分离成为可能。键合硅胶的反相色谱柱成为主力模式，后来向亚两微米颗粒的转变产生了超高效液相色谱系统，实现了更快、更高效的分离。

Key figures

• Lloyd Snyder
• Joseph Jack Kirkland
• Csaba Horváth

Seminal works

• snyder2010
• skoog2017

Frequently asked questions

什么是反相色谱法？

它是最常见的HPLC模式，使用非极性固定相和极性流动相，因此疏水性更强的分析物保留时间更长；它适用于非常广泛的有机和生物有机化合物。

HPLC与气相色谱有何不同？

HPLC使用液体流动相并在接近环境温度下工作，因此它可以处理气相色谱无法分析的非挥发性、极性和热不稳定化合物。