Sắc ký lỏng hiệu năng cao

Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) tách các thành phần của dịch chiết thực vật trên cột nhồi dưới áp suất cao, với các đầu dò cho phép tạo ra cả hồ sơ dấu vân tay đặc trưng và định lượng chính xác các hợp chất đánh dấu. Đây là phương pháp công cụ chính để tiêu chuẩn hóa định lượng nguyên liệu thảo dược và là công cụ trung tâm trong kiểm soát chất lượng dược liệu hiện đại.

Definition

Sắc ký lỏng hiệu năng cao là một kỹ thuật tách cột trong đó pha động lỏng mang các thành phần mẫu đi qua pha tĩnh nhồi dưới áp suất cao, phân giải chúng để phát hiện, từ đó có thể nhận dạng bằng thời gian lưu và mẫu hình, và định lượng so với các tiêu chuẩn tham chiếu.

Scope

Mục này bao gồm nguyên lý sắc ký lỏng cột, việc sử dụng HPLC để tạo dấu vân tay và định lượng các thành phần đánh dấu trong dược liệu thô và dịch chiết, cũng như vị trí của nó trong số các phương pháp kiểm soát chất lượng sắc ký. Đây là tài liệu tham khảo về phương pháp luận chứ không phải hướng dẫn lâm sàng.

Core questions

• Hồ sơ HPLC của một mẫu có khớp với dấu vân tay tham chiếu của vật liệu đã công bố không?
• Hàm lượng định lượng của các thành phần đánh dấu hoặc hoạt chất so với tiêu chuẩn là bao nhiêu?
• Sắc ký đồ có tiết lộ sự pha trộn, thay thế, hoặc các thành phần vượt quá giới hạn không?

Key concepts

• Sắc ký lỏng cột dưới áp suất cao
• Pha tĩnh và pha động; tách pha đảo
• Thời gian lưu và độ phân giải
• Đầu dò (UV/DAD, MS, ELSD)
• Định lượng so với các tiêu chuẩn tham chiếu
• Dấu vân tay HPLC và các hợp chất đánh dấu
• Phân tích hóa lượng tử của dấu vân tay

Mechanisms

Một bơm đẩy pha động lỏng mang mẫu đã hòa tan đi qua một cột nhồi các hạt pha tĩnh mịn; các thành phần tách ra theo sự phân bố khác nhau giữa các pha và rửa giải ở các thời gian lưu đặc trưng. Các đầu dò như tia cực tím hoặc mảng diode, khối phổ, hoặc thiết bị tán xạ ánh sáng bay hơi ghi lại các đỉnh rửa giải, tạo ra cả hồ sơ dấu vân tay và, bằng cách hiệu chuẩn với các tiêu chuẩn tham chiếu, định lượng hàm lượng các thành phần đánh dấu. Kết hợp dấu vân tay định tính với định lượng—thường được diễn giải bằng các kỹ thuật hóa lượng tử—cung cấp cơ sở vững chắc để kiểm soát nhận dạng, tính nhất quán và hàm lượng của nguyên liệu thảo dược (xie-2006, liang-2010, who-2011-qc).

Clinical relevance

HPLC hỗ trợ xác minh nhận dạng và đo lường chính xác các thành phần đánh dấu hoặc hoạt chất trong nguyên liệu thảo dược, điều này rất quan trọng để lập tài liệu về tính nhất quán và chất lượng của lô. Mục này mô tả một phương pháp phân tích và không phải là cơ sở cho các quyết định điều trị cá nhân.

Evidence & guidelines

Hướng dẫn kiểm soát chất lượng của WHO và các chuyên luận dược điển sử dụng HPLC để nhận dạng và định lượng nguyên liệu thảo dược, và các đánh giá về dấu vân tay sắc ký xác định HPLC, thường kết hợp với hóa lượng tử, là một phương pháp hàng đầu để đánh giá chất lượng thảo dược (who-2011-qc, xie-2006, liang-2010, evans-2009).

History

Sắc ký lỏng hiệu năng cao phát triển từ sắc ký cột cổ điển vào cuối thế kỷ XX và trở thành phương pháp tách định lượng chủ đạo trong phân tích dược phẩm; việc áp dụng nó vào việc tạo dấu vân tay và định lượng chất đánh dấu đã biến nó thành nền tảng của tiêu chuẩn hóa thuốc thảo dược, ngày càng được kết hợp với khối phổ và phân tích dữ liệu hóa lượng tử (xie-2006, liang-2010, evans-2009).

Seminal works

• xie-2006
• liang-2010

Frequently asked questions

Tại sao HPLC được ưu tiên để tiêu chuẩn hóa định lượng?

Vì nó phân giải các thành phần trên cột với các đầu dò nhạy và có thể được hiệu chuẩn so với các tiêu chuẩn tham chiếu, nó đo lường chính xác hàm lượng các hợp chất đánh dấu hoặc hoạt chất, điều mà các phương pháp định tính đơn giản hơn không thể làm được.

Dấu vân tay HPLC là gì?

Đó là mẫu hình đặc trưng của các đỉnh ở các thời gian lưu xác định được tạo ra bởi một dịch chiết; việc so sánh hồ sơ này với một tham chiếu giúp xác nhận nhận dạng và tính nhất quán và có thể được phân tích bằng các kỹ thuật hóa lượng tử.