Sắc ký lỏng hiệu năng cao

Sắc ký lỏng hiệu năng cao phân tách các hợp chất không bay hơi và không bền nhiệt bằng cách bơm pha động lỏng qua cột chứa vật liệu nhồi mịn dưới áp suất cao.

Definition

Sắc ký lỏng hiệu năng cao là một kỹ thuật phân tách trong đó pha động lỏng được đẩy dưới áp suất cao qua một cột chứa các hạt pha tĩnh mịn, phân tách các chất phân tích bằng tương tác khác nhau của chúng với hai pha.

Scope

Chủ đề này bao gồm sắc ký lỏng ở dạng hiệu năng cao: máy bơm và hệ thống gradient, cột chứa các hạt xốp nhỏ, các chế độ phân tách chính—pha đảo, pha thường, trao đổi ion và loại trừ kích thước—và các đầu dò bao gồm tử ngoại, mảng diode, huỳnh quang và khối phổ. Nó đề cập đến việc phát triển phương pháp, vai trò của thành phần pha động trong tính chọn lọc và định lượng từ diện tích đỉnh.

Core questions

• Các chế độ phân tách như pha đảo và trao đổi ion khác nhau như thế nào về cơ chế lưu giữ của chúng?
• Thành phần pha động, bao gồm rửa giải gradient, kiểm soát tính chọn lọc và thời gian chạy như thế nào?
• Tại sao các hạt pha tĩnh nhỏ hơn lại cải thiện hiệu quả, và với chi phí nào?
• Các đầu dò HPLC được chọn như thế nào về độ nhạy, tính chọn lọc và nhận dạng?

Key theories

Lưu giữ pha đảo

Trong chế độ pha đảo chiếm ưu thế, pha tĩnh không phân cực giữ lại các chất phân tích tỷ lệ thuận với tính kỵ nước của chúng từ pha động nước–hữu cơ phân cực; việc tăng phần hữu cơ làm giảm sự lưu giữ, mang lại sự phân tách có thể điều chỉnh, áp dụng rộng rãi cho các hợp chất hữu cơ.

Mechanisms

Một máy bơm áp suất cao đẩy pha động lỏng qua một cột chứa các hạt xốp mang pha tĩnh liên kết. Một mẫu được tiêm vào dòng chảy sẽ phân tách khi mỗi chất phân tích phân bố giữa pha động và pha tĩnh theo tính chất hóa học của nó; việc thay đổi thành phần pha động trong quá trình chạy, rửa giải gradient, làm sắc nét và tăng tốc độ phân tách. Các chất phân tích rửa giải đi qua một đầu dò mà diện tích đỉnh của chúng định lượng chúng so với các tiêu chuẩn hiệu chuẩn.

Clinical relevance

Sắc ký lỏng hiệu năng cao là phương pháp chủ đạo để định lượng dược phẩm và xác định tạp chất, đo lường thuốc và chất chuyển hóa điều trị, phân tích thực phẩm và sản phẩm tự nhiên, và đặc trưng hóa các phân tử sinh học, và là phương pháp hàng đầu cho sắc ký lỏng–khối phổ.

History

Sắc ký lỏng hiện đại xuất hiện vào cuối những năm 1960 và 1970 khi máy bơm, vật liệu nhồi hạt mịn và đầu dò nhạy cho phép phân tách lỏng dưới áp suất cao. Cột pha đảo với silica liên kết trở thành chế độ làm việc chính, và việc chuyển sang các hạt dưới hai micromet sau này đã tạo ra các hệ thống hiệu năng cực cao với các phân tách nhanh hơn, hiệu quả hơn.

Key figures

• Lloyd Snyder
• Joseph Jack Kirkland
• Csaba Horváth

Seminal works

• snyder2010
• skoog2017

Frequently asked questions

Sắc ký pha đảo là gì?

Đây là chế độ HPLC phổ biến nhất, sử dụng pha tĩnh không phân cực và pha động phân cực, do đó các chất phân tích kỵ nước hơn được giữ lại lâu hơn; nó phù hợp với một loạt rất rộng các hợp chất hữu cơ và sinh học hữu cơ.

HPLC khác với sắc ký khí như thế nào?

HPLC sử dụng pha động lỏng và hoạt động ở nhiệt độ gần môi trường, do đó nó xử lý các hợp chất không bay hơi, phân cực và dễ bị phân hủy nhiệt mà không thể phân tích bằng sắc ký khí.