Mantar Kültürü ve İzolasyonu
Mantar kültürü, canlı bir organizmanın elde edilebilmesi, incelenebilmesi, tanımlanabilmesi ve test edilebilmesi amacıyla bir hasta örneğinden yapay besiyerlerinde mantar yetiştirme uygulamasıdır. Doğrudan saptama yöntemlerine göre daha yavaş sonuç vermesine rağmen, kültür, kesin tür tanımlaması ve antifungal duyarlılık testi için canlı bir izolat sağladığından referans standart olarak kalmaktadır.
Tanım
Mantar kültürü ve izolasyonu, mantar büyümesini destekleyen koşullar altında seçici veya zenginleştirilmiş besiyerlerine ekim yaparak klinik materyalden canlı mantarları elde eden, daha ileri tanımlama ve test için saf bir izolat sağlayan laboratuvar teknikleri bütünüdür.
Kapsam
Bu konu, klinik örneklerden mantarların elde edilme prensiplerini kapsamaktadır: seçici ve zenginleştirilmiş besiyerleri, inkübasyon koşulları, kültürde mayalar ve küfler arasındaki ayrım ve saf bir izolatın morfoloji, kütle spektrometrisi veya dizileme ile tanımlamayı nasıl desteklediği ele alınmaktadır. Konu, kültürü bir laboratuvar yöntemi olarak ele almakta olup, örnek toplama protokolleri veya tedavi rehberliği sunmamaktadır.
Temel sorular
- Belirli bir örnekte şüphelenilen mantarı en iyi hangi besiyerleri ve inkübasyon koşulları ile elde edebiliriz?
- Klinik olarak anlamlı bir izolat, çevresel kontaminasyondan nasıl ayırt edilmektedir?
- Kültüre dayalı bir tanımlama, dizileme veya kütle spektrometrisi ile ne zaman doğrulanmayı gerektirmektedir?
- İnvaziv mantar hastalığında kültür duyarlılığının sınırları nelerdir?
Anahtar kavramlar
- Seçici ve zenginleştirilmiş besiyerleri (örn. Sabouraud agar)
- Maya ve küf büyümesi
- İnkübasyon sıcaklığı ve süresi
- Saf izolat ve subkültür
- Kontaminasyon ve gerçek patojen ayrımı
- Duyarlılık testi için substrat olarak kültür
- İzolatın polifazik tanımlanması
Mekanizmalar
Örnekler, mantar büyümesini desteklerken rakip bakterileri baskılamak üzere formüle edilmiş besiyerlerine ekilmektedir; klasik olarak Sabouraud dekstroz agar kullanılmakta, bazen antibakteriyel veya seçici katkı maddeleri eklenmektedir. Plaklar ve eğik agarlar inkübe edilmekte, birçok mantar yavaş büyüdüğü için genellikle uzun süreler boyunca tutulmakta ve dimorfizm veya termotoleransı ortaya çıkaracak sıcaklıklarda inkübe edilmektedir. Büyüme daha sonra değerlendirilmektedir: mayalar macunsu koloniler oluştururken, küfler makroskopik ve mikroskopik morfolojileri tanımlamaya rehberlik eden ipliksi, genellikle pigmentli koloniler üretmektedir. Kültürün sağladığı saf izolat, türlerin morfoloji, MALDI-TOF kütle spektrometrisi veya DNA dizileme ile doğrulandığı ve antifungal duyarlılığın ölçüldüğü substrattır. Canlı organizmaların seyrek olabilmesi nedeniyle, kültür derin veya tedavi edilmiş enfeksiyonlarda duyarsız kalabilmektedir; bu nedenle doğrudan ve moleküler yöntemlerle birlikte yorumlanmaktadır.
Klinik önem
Kültür, mantar patojenlerinin nasıl doğrulandığının ve adlandırıldığının temelini oluşturmakta ve normalde steril bir bölgeden alınan pozitif bir kültür, invaziv mantar hastalığının konsensüs tanımları içinde özel bir tanısal ağırlık taşımaktadır. Bu madde, yöntemi ve yorumlayıcı değerini açıklamaktadır; izolatların nasıl elde edildiğine dair bir referans materyal olup, örnek işleme veya hasta yönetimi için bir rehber değildir.
Kanıt ve kılavuzlar
British Society for Medical Mycology'den en iyi uygulama önerileri ve EORTC/MSGERC konsensüs tanımları, tanı yöntemleri arasında kültürün rolünü, mantarların steril bölgelerden elde edildiğinde taşıdığı ağırlığı ve bazı invaziv enfeksiyonlardaki bilinen duyarsızlığını açıklamaktadır. Referans atlasları, izolatları tanımlamak için kullanılan koloni ve mikroskopik morfolojiyi kataloglamaktadır.
Tarihçe
Tanımlanmış besiyerlerinde kültür, tıbbi mikolojinin temel aracı olmuştur; yirminci yüzyılın başlarında tanıtılan Sabouraud dekstroz agar, mantarları elde etmek ve tanımlamak için standart substrat haline gelmiştir. Yüzyılın büyük bir bölümünde tanımlama, kültürden okunan koloni ve mikroskopik morfolojiye dayanmış, kütle spektrometrisi ve dizileme ise ancak daha sonra kültürlenmiş izolatın tanımlanmasına hassasiyet katmıştır.
İlgili konular
Temel eserler
- schelenz-2015
- dehoog-2020
Sıkça sorulan sorular
- Mantar kültürü neden genellikle bu kadar uzun sürmektedir?
- Tıbbi açıdan önemli birçok küf ve bazı mayalar yavaş büyüdüğünden, görünür büyüme ve güvenilir tanımlama sağlamak için kültürler günler ila haftalar boyunca tutulabilmektedir; bu da daha hızlı doğrudan ve moleküler yöntemlerin kültürle birlikte kullanılmasının nedenlerinden biridir.
- Pozitif bir mantar kültürü her zaman enfeksiyon anlamına mı gelmektedir?
- Mutlaka değil. Mantarlar çevrede ve vücut yüzeylerinde yaygın olduğundan, pozitif bir kültürün bağlam içinde yorumlanması gerekmektedir; normalde steril bir bölgeden elde edilmesi, kontamine veya kolonize bir örnekten elde edilmesinden çok daha anlamlıdır.