Получение ооцитов, оплодотворение и раннее развитие эмбриона

После стимуляции яичников зрелые ооциты извлекаются из яичников путем трансвагинальной аспирации под контролем ультразвука и доставляются в эмбриологическую лабораторию, где они оплодотворяются спермой и культивируются. Оплодотворенный ооцит (зигота) делится в течение следующих дней, образуя эмбрион на стадии дробления, и может прогрессировать до бластоцисты, из которой выбирается эмбрион для переноса. Эта тема охватывает процедурное и лабораторное ядро цикла ЭКО.

Definition

Получение ооцитов — это аспирация ооцитов из фолликулов яичника, обычно под контролем трансвагинального ультразвука. Оплодотворение in vitro — это слияние ооцита и сперматозоида в лаборатории, достигаемое путем традиционного осеменения или интрацитоплазматической инъекции сперматозоида, после чего полученный эмбрион культивируется на ранних стадиях предимплантационного развития.

Scope

Тема охватывает методы получения ооцитов и основные риски этой процедуры, два пути оплодотворения в лаборатории (традиционное осеменение и интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида), оценку оплодотворения и этапы раннего развития эмбриона от зиготы через стадии дробления до бластоцисты. Это методологический и биологический справочник, а не оперативный или лабораторный протокол.

Core questions

• Как зрелые ооциты извлекаются из яичников, и каковы основные процедурные риски?
• Когда используется традиционное осеменение и когда показана интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида (ИКСИ)?
• Как распознается успешное оплодотворение, и каковы этапы раннего развития эмбриона?
• Что отличает эмбрионы на стадии дробления от эмбрионов на стадии бластоцисты для целей культивирования и отбора?

Key concepts

• Трансвагинальная аспирация ооцитов под контролем ультразвука
• Зрелость ооцитов (метафаза II)
• Традиционное оплодотворение in vitro
• Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида (ИКСИ)
• Проверка оплодотворения и пронуклеусы
• Эмбрион на стадии дробления
• Формирование бластоцисты
• Длительное культивирование эмбрионов

Mechanisms

После запуска окончательного созревания ооциты аспирируются из каждого фолликула, как правило, через иглу, вводимую под контролем трансвагинального ультразвука. Эта процедура сопряжена с низким, но реальным риском кровотечения и инфекции (Ludwig et al., 2006). В лаборатории зрелые ооциты оплодотворяются либо путем их помещения с подготовленной подвижной спермой (традиционное осеменение), либо, когда количество или функция сперматозоидов недостаточны, путем интрацитоплазматической инъекции сперматозоида, при которой один сперматозоид вводится в цитоплазму ооцита (Palermo et al., 1992). Оплодотворение подтверждается появлением двух пронуклеусов. Затем зигота подвергается последовательным делениям дробления в течение первых двух-трех дней и может компактироваться и образовывать полость, формируя бластоцисту к пятому-шестому дню; эмбрионы могут быть выбраны для переноса на стадии дробления или бластоцисты (Blake et al., 2004).

Clinical relevance

Получение ооцитов и лабораторная фаза определяют, сколько и какие эмбрионы станут доступными, а выбор между традиционным осеменением и ИКСИ, а также между культивированием на стадии дробления и бластоцисты формирует последующие результаты. Эта статья описывает эти шаги для справки и оценки доказательств; она не является хирургическим, анестезиологическим или лабораторным протоколом и не содержит индивидуальных рекомендаций.

Epidemiology

Трансвагинальное получение ооцитов является рутинной процедурой с низкой частотой осложнений в крупных проспективных исследованиях (Ludwig et al., 2006). ИКСИ, введенная в 1992 году, быстро стала стандартным методом оплодотворения, особенно при мужском факторе бесплодия (Palermo et al., 1992). Доля эмбрионов, культивируемых до стадии бластоцисты перед переносом, возросла по мере улучшения лабораторных систем культивирования (Blake et al., 2004).

Evidence & guidelines

Доказательства получены из проспективных процедурных исследований, оригинальных отчетов по ИКСИ и систематических обзоров Кокрейна, сравнивающих стадии культивирования и переноса (Blake et al., 2004); профессиональные общества, такие как ESHRE и ASRM, выпускают лабораторные и процедурные рекомендации. Подробная оперативная или лабораторная техника здесь не воспроизводится.

History

Раннее ЭКО основывалось на лапароскопическом сборе яйцеклеток, как это было в работе, приведшей к первому рождению ребенка с помощью ЭКО (Steptoe & Edwards, 1978); трансвагинальная аспирация под контролем ультразвука позже стала стандартным, менее инвазивным методом. Введение интрацитоплазматической инъекции сперматозоида в 1992 году изменило лабораторную работу с ооцитами, позволив оплодотворение даже при очень малом количестве или плохой подвижности сперматозоидов (Palermo et al., 1992), а улучшения в культуральных средах впоследствии сделали рутинное культивирование до стадии бластоцисты осуществимым (Blake et al., 2004).

Debates

Культивирование на стадии дробления против культивирования на стадии бластоцисты

Культивирование эмбрионов до стадии бластоцисты может помочь в отборе и улучшить результаты на один перенос, но также сопряжено с риском отсутствия эмбриона, пригодного для переноса; Кокрейновский обзор рассматривает компромиссы, и оптимальная стадия для переноса остается практическим вопросом.

Использование ИКСИ помимо мужского фактора бесплодия

ИКСИ была разработана для тяжелого мужского фактора бесплодия, но ее использование расширилось до случаев, не связанных с мужским фактором; обсуждается, улучшает ли это более широкое применение результаты по сравнению с традиционным осеменением, поскольку процедура была валидирована в условиях мужского фактора.

Key figures

• Robert Edwards
• Patrick Steptoe
• Gianpiero Palermo
• André Van Steirteghem

Seminal works

• palermo-1992
• steptoe-edwards-1978

Frequently asked questions

Является ли получение ооцитов серьезной операцией?

Это короткая процедура, выполняемая под контролем ультразвука и обычно с использованием некоторой формы седации или анестезии. Крупные проспективные исследования сообщают о низкой частоте осложнений, таких как кровотечение или инфекция, хотя это остается инвазивной процедурой; эта статья не содержит инструкций по процедуре или восстановлению.

В чем разница между традиционным ЭКО и ИКСИ?

При традиционном ЭКО подготовленные сперматозоиды помещаются к ооциту, и оплодотворение происходит самостоятельно. При ИКСИ один сперматозоид вводится непосредственно в ооцит. ИКСИ была разработана для случаев, когда сперматозоидов слишком мало или они слишком повреждены, чтобы оплодотворить яйцеклетку без посторонней помощи.