Fixação e Inclusão de Tecidos

A fixação e a inclusão são as primeiras etapas preparatórias da histologia. A fixação estabiliza quimicamente o tecido para que pare de se decompor e mantenha a sua estrutura, enquanto a inclusão envolve o tecido fixado num meio de suporte firme para que possa ser cortado em secções finas. Juntas, elas determinam a fidelidade com que a lâmina final reflete o tecido vivo.

Definition

A fixação de tecidos é o tratamento químico ou físico que detém a autólise e a putrefação e estabiliza a estrutura do tecido; a inclusão é a infiltração subsequente do tecido fixado e processado com um meio de suporte (como parafina ou resina) para que secções finas possam ser cortadas.

Scope

Este tópico abrange os propósitos e as principais químicas da fixação, as etapas do processamento de tecidos (desidratação, diafanização, infiltração) e a inclusão em parafina ou resina. É uma referência metodológica e não fornece protocolos de dosagem clínica ou laboratorial.

Core questions

• Como um fixador impede a degradação do tecido enquanto preserva a estrutura?
• Como os fixadores de reticulação e coagulantes diferem nos seus efeitos?
• Por que o tecido deve ser desidratado, diafanizado e infiltrado antes da inclusão?
• Como o meio de inclusão restringe a espessura da secção e a análise a jusante?

Key concepts

• Autólise e sua interrupção
• Fixadores de reticulação (aldeído)
• Fixadores coagulantes (à base de álcool)
• Fixação com formalina
• Desidratação e diafanização
• Inclusão em parafina
• Inclusão em resina

Mechanisms

Os fixadores atuam por um de dois mecanismos amplos. Fixadores de reticulação, como o formaldeído e o glutaraldeído, formam pontes de metileno ou mais longas entre grupos reativos (principalmente em proteínas), fixando a estrutura molecular; o glutaraldeído, com dois grupos aldeído, reticula mais extensivamente e preserva a ultraestrutura fina especialmente bem, razão pela qual se tornou central para a fixação em microscopia eletrónica (Sabatini, 1963). Fixadores coagulantes, como o etanol, atuam desidratando e precipitando proteínas. Como a reticulação pode mascarar antígenos, foram desenvolvidos fixadores para equilibrar a preservação estrutural com a reatividade retida, como na formulação de periodato-lisina-paraformaldeído desenvolvida para imunomicroscopia eletrónica (McLean & Nakane, 1974). Após a fixação, o tecido é desidratado através de álcoois graduados, diafanizado num solvente miscível com o meio de inclusão e infiltrado com parafina fundida ou resina líquida, que, ao endurecer, confere o suporte mecânico necessário para a microtomia.

Clinical relevance

A fixação e a inclusão determinam a qualidade e a preservação molecular dos blocos de tecido utilizados em patologia diagnóstica e pesquisa. Esta entrada explica os métodos conceitualmente; descreve como as preparações são feitas e não é uma base para decisões individuais de diagnóstico ou tratamento.

Evidence & guidelines

A prática de fixação e processamento está consolidada em referências padrão de histotecnologia, como Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques (Suvarna et al., 2018) e Kiernan (2015). Variáveis de fixação pré-analíticas (tipo de fixador, tempo até a fixação, duração) são reconhecidas como influenciando ensaios moleculares a jusante e são abordadas na literatura de qualidade laboratorial dentro dos tópicos relacionados de imuno-histoquímica e avaliação de qualidade.

History

A química prática da fixação desenvolveu-se ao longo do século XIX, com a formalina introduzida como fixador de tecidos no final da década de 1890 e a inclusão em parafina estabelecida como um método para obter secções finas. No século XX, a fixação com glutaraldeído foi caracterizada pela preservação ultraestrutural (Sabatini, 1963), e fixadores especializados foram formulados para preservar a antigenicidade juntamente com a estrutura (McLean & Nakane, 1974).

Key figures

• David Sabatini
• Paul Nakane

Seminal works

• sabatini-1963
• mclean-1974

Frequently asked questions

Por que a formalina é o fixador mais comum para histologia de rotina?

O formaldeído tamponado penetra razoavelmente bem no tecido, reticula proteínas para preservar amplamente a estrutura, é barato e é compatível com colorações de rotina e a maioria dos ensaios a jusante, o que o tornou o fixador de uso geral padrão.

Por que o tecido deve ser desidratado e diafanizado antes da inclusão em parafina?

A parafina não é miscível com a água, então a água do tecido é substituída por álcoois graduados (desidratação) e depois por um solvente miscível com a parafina (diafanização) antes que a parafina fundida possa infiltrar e suportar o tecido.