Fixação e Coloração de Amostras

A fixação e a coloração são as duas etapas químicas que transformam uma amostra citológica depositada numa lâmina interpretável. A fixação estabiliza as células e preserva a sua estrutura interna; a coloração confere as cores e o contraste que permitem ao citopatologista distinguir o núcleo do citoplasma e ler os detalhes da cromatina. A combinação do método de fixação com a coloração é uma escolha deliberada que determina quais características celulares são enfatizadas.

Definition

A fixação e coloração de amostras são as etapas preparatórias que preservam a morfologia celular (fixação) e conferem cor seletiva aos componentes celulares (coloração) para que uma lâmina citológica possa ser lida ao microscópio.

Scope

Esta entrada explica por que e como as amostras citológicas são fixadas (fixação úmida versus secagem ao ar deliberada), os princípios das principais colorações citológicas e como a combinação fixação-coloração é ajustada à questão diagnóstica. É uma referência de nível metodológico e não fornece instruções específicas para o paciente.

Key concepts

• Fixação coagulante em álcool e fixação úmida
• Secagem ao ar deliberada como estado preparatório
• Coloração nuclear versus citoplasmática
• A coloração de Papanicolaou (transparente, policromática)
• Colorações de Romanowsky para esfregaços secos ao ar
• Artefato de secagem e seu efeito no detalhe nuclear
• Montagem com lamínula, clarificação e permanência da lâmina

Mechanisms

A fixação interrompe a autólise e mantém as proteínas celulares e os ácidos nucleicos no lugar. Em citologia, o fixador dominante é o etanol ou um spray à base de álcool aplicado enquanto o esfregaço ainda está úmido (fixação úmida), o que preserva a cromatina nuclear fina necessária para a coloração de Papanicolaou. Alternativamente, um esfregaço é deixado secar ao ar, um estado que achata e aumenta as células e é a preparação exigida para as colorações de Romanowsky. A coloração explora a afinidade de corantes carregados por componentes celulares: corantes básicos (catiônicos) ligam-se à cromatina nuclear ácida, enquanto corantes ácidos (aniônicos) colorem as proteínas citoplasmáticas. A coloração de Papanicolaou combina uma hematoxilina nuclear com múltiplos contracorantes para produzir células transparentes e policromáticas; as colorações de Romanowsky combinam corantes de azur e eosina cuja interação produz a cromatina roxa característica e cores metacromáticas (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982; Koss & Melamed 2006).

Clinical relevance

Como a fixação e a coloração estabelecem a visibilidade das próprias características usadas para classificar as células, elas são inseparáveis do diagnóstico e do relatório citológico. Esta entrada descreve os métodos e sua justificativa como base para a compreensão da prática laboratorial; não é uma base para decisões clínicas individuais.

Evidence & guidelines

A literatura metodológica estabelece os papéis complementares das duas grandes famílias de colorações – a coloração de Papanicolaou fixada em álcool para detalhes nucleares e da cromatina e as colorações de Romanowsky secas ao ar para características citoplasmáticas e de fundo – e o trabalho de padronização de Wittekind definiu uma combinação de azur B-eosina Y como uma coloração de Romanowsky-Giemsa de referência (Wittekind 1982; Bibbo & Wilbur 2014). Textos de referência enfatizam que o tempo e a qualidade da fixação são os principais determinantes controláveis do resultado da coloração e de artefatos como a distorção nuclear induzida pela secagem (Koss & Melamed 2006).

History

A coloração citológica surgiu da histoquímica do século XIX e das colorações hematológicas de Romanowsky e Giemsa, sendo posteriormente transformada para citologia esfoliativa pela coloração policromática e transparente de Papanicolaou para esfregaços fixados a úmido na década de 1940. Trabalhos posteriores do século XX, incluindo os estudos de padronização de corantes de Wittekind, procuraram tornar a coloração de Romanowsky reprodutível entre laboratórios (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982).

Key figures

• George Papanicolaou
• Dietrich Wittekind

Seminal works

• papanicolaou-1942
• wittekind-1982
• koss-melamed-2006

Frequently asked questions

Por que alguns esfregaços citológicos devem ser fixados enquanto ainda úmidos?

A fixação úmida (álcool) preserva o detalhe fino da cromatina nuclear do qual a coloração de Papanicolaou depende. Se tal esfregaço secar antes da fixação, o artefato de secagem distorce os núcleos e prejudica a interpretação.

O que determina qual coloração uma amostra citológica recebe?

É determinado pelo estado de fixação e pela questão diagnóstica: esfregaços fixados a úmido recebem a coloração de Papanicolaou para detalhes nucleares, enquanto esfregaços deliberadamente secos ao ar recebem uma coloração de Romanowsky que destaca características citoplasmáticas e de fundo.