Técnicas de Diagnóstico Molecular

As técnicas de diagnóstico molecular detectam e caracterizam bactérias pelos seus ácidos nucleicos, em vez de pelo crescimento, utilizando métodos como a reação em cadeia da polimerase e o sequenciamento. Podem identificar organismos diretamente a partir de amostras, muitas vezes mais rapidamente do que a cultura e, por vezes, quando a cultura falha, e podem detetar determinantes de resistência.

Definition

As técnicas de diagnóstico molecular são métodos laboratoriais que detectam, amplificam ou sequenciam ácidos nucleicos microbianos para identificar organismos ou determinantes de resistência, tipicamente sem exigir que o organismo seja cultivado.

Scope

O tópico abrange testes de amplificação de ácidos nucleicos, reação em cadeia da polimerase em tempo real e multiplex, identificação baseada em sequenciamento e painéis moleculares sindrómicos, juntamente com os seus pontos fortes e precauções interpretativas. É enquadrado como um assunto metodológico e não fornece instruções de teste ou tratamento para pacientes individuais.

Core questions

• Como os testes de amplificação de ácidos nucleicos detectam bactérias?
• Quando os métodos moleculares podem ter sucesso onde a cultura falha, e quais são os seus limites?
• Como os diagnósticos moleculares e baseados em cultura se complementam?

Key concepts

• Teste de amplificação de ácidos nucleicos
• PCR em tempo real (quantitativa)
• Painéis multiplex e sindrómicos
• Sequenciamento do gene 16S rRNA
• Deteção de genes de resistência
• Deteção de organismos não viáveis
• Sensibilidade e especificidade analíticas

Mechanisms

Os métodos moleculares visam uma sequência específica de ácido nucleico e amplificam-na para que mesmo pequenas quantidades de organismo possam ser detectadas; os formatos em tempo real quantificam o alvo e encurtam o tempo de resposta, enquanto os painéis multiplex testam muitos patógenos de uma só vez (Espy 2006). O sequenciamento de genes conservados, como o 16S rRNA, pode identificar organismos difíceis de cultivar ou fenotipar. Como estes métodos detectam ácido nucleico em vez de crescimento, podem produzir resultados quando a cultura é negativa, incluindo após exposição a antibióticos, mas também podem detectar organismos não viáveis ou colonizadores, pelo que os resultados requerem interpretação no contexto. Revisões descrevem como os diagnósticos moleculares melhoraram a velocidade e a sensibilidade, ao mesmo tempo que levantaram novas questões interpretativas (Espy 2006; Caliendo 2013).

Clinical relevance

Os diagnósticos moleculares influenciam a rapidez e a fiabilidade com que as infeções são atribuídas a organismos e como a resistência é detectada, mas a sua interpretação difere da cultura porque detetar um gene não é o mesmo que recuperar um organismo viável e testável quanto à suscetibilidade. O tópico descreve como a evidência laboratorial é gerada e não é uma base para decisões individuais de diagnóstico ou tratamento.

Evidence & guidelines

Revisões abrangentes descrevem as aplicações e o desempenho da PCR em tempo real e de outros métodos moleculares na microbiologia clínica de rotina (Espy 2006) e a mudança mais ampla para diagnósticos melhorados de doenças infecciosas (Caliendo 2013); textos padrão detalham os métodos moleculares e o seu lugar ao lado da cultura (Jorgensen 2015).

History

A reação em cadeia da polimerase, introduzida na década de 1980, tornou prática a deteção direcionada de ácidos nucleicos, e os formatos em tempo real e multiplex entraram subsequentemente nos laboratórios clínicos de rotina, ampliando o diagnóstico molecular e a identificação baseada em sequências (Espy 2006; Caliendo 2013).

Seminal works

• espy-2006
• caliendo-2013

Frequently asked questions

Os testes moleculares podem substituir a cultura?

Não totalmente; muitas vezes detectam organismos mais rapidamente e, por vezes, quando a cultura falha, mas a cultura ainda fornece um isolado viável para caracterização adicional, e os resultados moleculares que detectam ácido nucleico requerem uma interpretação cuidadosa.

Por que um teste molecular pode ser positivo quando a cultura é negativa?

Os métodos moleculares detectam ácido nucleico em vez de crescimento, pelo que podem permanecer positivos quando os organismos não são viáveis ou estão presentes em baixo número, incluindo após exposição a antibióticos que impede a recuperação por cultura.