Citoquímica e Citometria de Fluxo na Leucemia

A citoquímica e a citometria de fluxo são as técnicas laboratoriais que transformam o diagnóstico de leucemia de uma impressão morfológica em uma linhagem e um imunofenótipo definidos. As colorações citoquímicas revelam propriedades enzimáticas e metabólicas das células leucêmicas, enquanto a citometria de fluxo multiparamétrica mede simultaneamente muitos marcadores de superfície e intracelulares, atribuindo a linhagem e detectando doença residual mensurável.

Definition

Citoquímica e citometria de fluxo são métodos laboratoriais para caracterizar células leucêmicas: a citoquímica utiliza colorações que revelam características enzimáticas ou bioquímicas (por exemplo, atividade de mieloperoxidase), e a citometria de fluxo multiparamétrica mede múltiplos antígenos de superfície e intracelulares por célula para atribuir a linhagem, definir o imunofenótipo e quantificar a doença residual.

Scope

Este tópico abrange os métodos utilizados para caracterizar células leucêmicas além da morfologia: colorações citoquímicas clássicas, como a mieloperoxidase, e a imunofenotipagem moderna por citometria de fluxo multiparamétrica, incluindo painéis de anticorpos padronizados e a detecção de doença residual mensurável (mínima). É um material de referência sobre metodologia laboratorial, não um protocolo clínico.

Key concepts

• Mieloperoxidase e outras colorações citoquímicas
• Atribuição de linhagem por imunofenótipo
• Citometria de fluxo multiparamétrica (multicolor)
• Painéis de anticorpos padronizados
• Expressão antigênica aberrante
• Gating e análise de população
• Detecção de doença residual mensurável (mínima)

Mechanisms

As colorações citoquímicas exploram enzimas e constituintes específicos das células: a atividade da mieloperoxidase, por exemplo, marca a linhagem mieloide e ajuda a separar a leucemia mieloide aguda da leucemia linfoblástica aguda em um esfregaço corado. A citometria de fluxo suspende as células em um fluxo que passa por lasers e registra a dispersão da luz e a fluorescência de marcadores ligados a anticorpos, permitindo que muitos antígenos sejam medidos em cada célula; combinações antigênicas características e aberrantes definem a linhagem e identificam a população leucêmica. A mesma abordagem, aplicada com alta sensibilidade e painéis padronizados, detecta pequenas populações leucêmicas residuais após o tratamento como doença residual mensurável (van Dongen et al., 2012; Schuurhuis et al., 2018).

Clinical relevance

Essas técnicas sustentam a atribuição de linhagem e a imunofenotipagem das quais depende a classificação moderna da leucemia, e a avaliação da doença residual mensurável por citometria de fluxo tornou-se um importante marcador de resposta na literatura. Esta entrada descreve os métodos em nível de referência e não é uma orientação para interpretar os resultados de um paciente individual.

Evidence & guidelines

Esforços de padronização, como os painéis de anticorpos EuroFlow, definem a imunofenotipagem por citometria de fluxo reprodutível, e o Grupo de Trabalho MRD da European LeukemiaNet fornece critérios de consenso para a avaliação da doença residual mensurável na leucemia mieloide aguda; os critérios de linhagem também estão incorporados na classificação da OMS (van Dongen et al., 2012; Schuurhuis et al., 2018; Arber et al., 2016).

History

A coloração citoquímica foi o meio original de refinar o diagnóstico morfológico da leucemia aguda e atribuir a linhagem. A imunofenotipagem por citometria de fluxo então suplantou amplamente a citoquímica para a atribuição de linhagem, medindo muitos antígenos por célula, e iniciativas de padronização e documentos de consenso sobre doença residual mensurável posteriormente estenderam seu papel para uma avaliação reprodutível e de alta sensibilidade (van Dongen et al., 2012; Schuurhuis et al., 2018).

Seminal works

• van-dongen-2012
• schuurhuis-2018

Frequently asked questions

Por que a coloração de mieloperoxidase é útil na leucemia aguda?

A mieloperoxidase é um marcador da linhagem mieloide, então sua presença em uma coloração citoquímica apoia um diagnóstico de leucemia mieloide aguda e ajuda a distingui-la da leucemia linfoblástica aguda.

O que é a detecção de doença residual mensurável por citometria de fluxo?

É o uso de citometria de fluxo multiparamétrica de alta sensibilidade para detectar pequenas populações de células leucêmicas que persistem após o tratamento, abaixo do nível visível na morfologia de rotina, como um marcador de resposta.