Teknik Diagnostik Molekuler

Teknik diagnostik molekuler mendeteksi dan mengkarakterisasi bakteri berdasarkan asam nukleatnya daripada pertumbuhannya, menggunakan metode seperti reaksi berantai polimerase dan sekuensing. Teknik ini dapat mengidentifikasi organisme langsung dari spesimen, seringkali lebih cepat daripada kultur dan terkadang ketika kultur gagal, serta dapat mendeteksi determinan resistansi.

Definition

Teknik diagnostik molekuler adalah metode laboratorium yang mendeteksi, mengamplifikasi, atau mengurutkan asam nukleat mikroba untuk mengidentifikasi organisme atau determinan resistansi, biasanya tanpa memerlukan organisme untuk dikultur.

Scope

Topik ini mencakup tes amplifikasi asam nukleat, reaksi berantai polimerase waktu nyata dan multipleks, identifikasi berbasis sekuensing, dan panel molekuler sindromik, beserta kekuatan dan kehati-hatian interpretasinya. Ini dibingkai sebagai subjek metodologis dan tidak memberikan instruksi pengujian atau pengobatan untuk pasien individu.

Core questions

• Bagaimana tes amplifikasi asam nukleat mendeteksi bakteri?
• Kapan metode molekuler dapat berhasil ketika kultur gagal, dan apa batasannya?
• Bagaimana diagnostik molekuler dan berbasis kultur saling melengkapi?

Key concepts

• Pengujian amplifikasi asam nukleat
• PCR waktu nyata (kuantitatif)
• Panel multipleks dan sindromik
• Sekuensing gen 16S rRNA
• Deteksi gen resistansi
• Deteksi organisme yang tidak layak
• Sensitivitas dan spesifisitas analitik

Mechanisms

Metode molekuler menargetkan urutan asam nukleat spesifik dan mengamplifikasinya sehingga bahkan sejumlah kecil organisme dapat dideteksi; format waktu nyata mengukur target dan mempersingkat waktu penyelesaian, sementara panel multipleks menguji banyak patogen sekaligus (Espy 2006). Sekuensing gen yang terlindungi seperti 16S rRNA dapat mengidentifikasi organisme yang sulit dikultur atau difenotipe. Karena metode ini mendeteksi asam nukleat daripada pertumbuhan, metode ini dapat memberikan hasil ketika kultur negatif, termasuk setelah paparan antibiotik, tetapi juga dapat mendeteksi organisme yang tidak layak atau kolonis, sehingga hasilnya memerlukan interpretasi dalam konteks. Tinjauan menjelaskan bagaimana diagnostik molekuler telah meningkatkan kecepatan dan sensitivitas sambil menimbulkan pertanyaan interpretatif baru (Espy 2006; Caliendo 2013).

Clinical relevance

Diagnostik molekuler memengaruhi seberapa cepat dan andal infeksi dikaitkan dengan organisme dan bagaimana resistansi dideteksi, tetapi interpretasinya berbeda dari kultur karena mendeteksi gen tidak sama dengan memulihkan organisme yang layak dan dapat diuji kerentanannya. Topik ini menjelaskan bagaimana bukti laboratorium dihasilkan dan bukan merupakan dasar untuk keputusan diagnostik atau pengobatan individu.

Evidence & guidelines

Tinjauan komprehensif menjelaskan aplikasi dan kinerja PCR waktu nyata dan metode molekuler lainnya dalam mikrobiologi klinis rutin (Espy 2006) dan pergeseran yang lebih luas menuju diagnostik penyakit menular yang lebih baik (Caliendo 2013); teks standar merinci metode molekuler dan tempatnya di samping kultur (Jorgensen 2015).

History

Reaksi berantai polimerase, yang diperkenalkan pada tahun 1980-an, membuat deteksi asam nukleat yang ditargetkan menjadi praktis, dan format waktu nyata serta multipleks kemudian masuk ke laboratorium klinis rutin, memperluas diagnosis molekuler dan identifikasi berbasis sekuensing (Espy 2006; Caliendo 2013).

Seminal works

• espy-2006
• caliendo-2013

Frequently asked questions

Dapatkah tes molekuler menggantikan kultur?

Tidak sepenuhnya; tes ini seringkali mendeteksi organisme lebih cepat dan terkadang ketika kultur gagal, tetapi kultur masih menyediakan isolat yang layak untuk karakterisasi lebih lanjut, dan hasil molekuler yang mendeteksi asam nukleat memerlukan interpretasi yang cermat.

Mengapa tes molekuler bisa positif ketika kultur negatif?

Metode molekuler mendeteksi asam nukleat daripada pertumbuhan, sehingga dapat tetap positif ketika organisme tidak layak atau hadir dalam jumlah rendah, termasuk setelah paparan antibiotik yang mencegah pemulihan kultur.