उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी

उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी उच्च दबाव में महीन पैकिंग के एक स्तंभ के माध्यम से एक तरल मोबाइल चरण को पंप करके गैर-वाष्पशील और तापीय रूप से अस्थिर यौगिकों को अलग करती है।

Definition

उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी एक पृथक्करण तकनीक है जिसमें एक तरल मोबाइल चरण को उच्च दबाव में महीन स्थिर-चरण कणों के एक स्तंभ के माध्यम से धकेला जाता है, जिससे विश्लेषकों को दो चरणों के साथ उनकी विभेदक बातचीत से अलग किया जाता है।

Scope

यह विषय अपने उच्च-प्रदर्शन रूप में तरल क्रोमैटोग्राफी को शामिल करता है: पंप और ग्रेडिएंट सिस्टम, छोटे झरझरा कणों से भरे स्तंभ, मुख्य पृथक्करण मोड—रिवर्स-फेज, सामान्य-फेज, आयन-एक्सचेंज, और आकार-बहिष्करण—और पराबैंगनी, डायोड-एरे, प्रतिदीप्ति, और मास स्पेक्ट्रोमेट्रिक सहित डिटेक्टर। यह विधि विकास, चयनात्मकता में मोबाइल-फेज संरचना की भूमिका, और पीक क्षेत्रों से मात्रा निर्धारण को संबोधित करता है।

Core questions

• रिवर्स-फेज और आयन-एक्सचेंज जैसे पृथक्करण मोड उनके प्रतिधारण तंत्र में कैसे भिन्न होते हैं?
• ग्रेडिएंट इल्यूशन सहित मोबाइल-फेज संरचना, चयनात्मकता और रन टाइम को कैसे नियंत्रित करती है?
• छोटे स्थिर-चरण कण दक्षता में सुधार क्यों करते हैं, और किस कीमत पर?
• संवेदनशीलता, चयनात्मकता और पहचान के लिए एचपीएलसी डिटेक्टरों का चयन कैसे किया जाता है?

Key theories

रिवर्स-फेज प्रतिधारण

प्रमुख रिवर्स-फेज मोड में, एक गैर-ध्रुवीय स्थिर चरण एक ध्रुवीय जलीय-कार्बनिक मोबाइल चरण से उनकी हाइड्रोफोबिसिटी के अनुपात में विश्लेषकों को बनाए रखता है; कार्बनिक अंश को बढ़ाने से प्रतिधारण कम हो जाता है, जिससे कार्बनिक यौगिकों का एक ट्यून करने योग्य, व्यापक रूप से लागू पृथक्करण होता है।

Mechanisms

एक उच्च दबाव वाला पंप झरझरा कणों से भरे एक स्तंभ के माध्यम से एक तरल मोबाइल चरण को चलाता है जिसमें एक बंधुआ स्थिर चरण होता है। प्रवाह में इंजेक्ट किया गया एक नमूना अलग हो जाता है क्योंकि प्रत्येक विश्लेषक अपनी रसायन विज्ञान के अनुसार मोबाइल और स्थिर चरणों के बीच विभाजित होता है; रन के दौरान मोबाइल-चरण संरचना को बदलने से, ग्रेडिएंट इल्यूशन, पृथक्करण को तेज और गति देता है। इल्यूटिंग विश्लेषक एक डिटेक्टर से गुजरते हैं जिनके पीक क्षेत्र अंशांकन मानकों के खिलाफ उनकी मात्रा निर्धारित करते हैं।

Clinical relevance

उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी फार्मास्युटिकल परख और अशुद्धता प्रोफाइलिंग, चिकित्सीय दवा और मेटाबोलाइट माप, भोजन और प्राकृतिक-उत्पाद विश्लेषण, और बायोमोलेक्यूल लक्षण वर्णन के लिए प्रमुख विधि है, और तरल क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री के लिए अग्रणी फ्रंट एंड है।

History

आधुनिक तरल क्रोमैटोग्राफी 1960 के दशक के अंत और 1970 के दशक में उभरी जब पंप, महीन कण पैकिंग, और संवेदनशील डिटेक्टरों ने उच्च दबाव में तरल पृथक्करण की अनुमति दी। बंधुआ सिलिका के साथ रिवर्स-फेज कॉलम कार्यप्रणाली बन गए, और बाद में दो-माइक्रोमीटर से कम कणों में जाने से अल्ट्रा-उच्च-प्रदर्शन सिस्टम का उत्पादन हुआ जिसमें तेज, अधिक कुशल पृथक्करण हुए।

Key figures

• Lloyd Snyder
• Joseph Jack Kirkland
• Csaba Horváth

Seminal works

• snyder2010
• skoog2017

Frequently asked questions

रिवर्स-फेज क्रोमैटोग्राफी क्या है?

यह सबसे आम एचपीएलसी मोड है, जिसमें एक गैर-ध्रुवीय स्थिर चरण और एक ध्रुवीय मोबाइल चरण का उपयोग किया जाता है, इसलिए अधिक हाइड्रोफोबिक विश्लेषक लंबे समय तक बनाए रहते हैं; यह कार्बनिक और जैव-कार्बनिक यौगिकों की एक बहुत विस्तृत श्रृंखला के लिए उपयुक्त है।

एचपीएलसी गैस क्रोमैटोग्राफी से कैसे भिन्न है?

एचपीएलसी एक तरल मोबाइल चरण का उपयोग करता है और परिवेश के तापमान के करीब काम करता है, इसलिए यह गैर-वाष्पशील, ध्रुवीय, और तापीय रूप से नाजुक यौगिकों को संभालता है जिनका गैस क्रोमैटोग्राफी द्वारा विश्लेषण नहीं किया जा सकता है।