Cytochimie et cytométrie en flux dans la leucémie

La cytochimie et la cytométrie en flux sont les techniques de laboratoire qui transforment un diagnostic de leucémie d'une impression morphologique en une lignée et un immunophénotype définis. Les colorations cytochimiques révèlent les propriétés enzymatiques et métaboliques des cellules leucémiques, tandis que la cytométrie en flux multiparamétrique mesure simultanément de nombreux marqueurs de surface et intracellulaires, permettant conjointement d'attribuer une lignée et de détecter la maladie résiduelle mesurable.

Definition

La cytochimie et la cytométrie en flux sont des méthodes de laboratoire pour caractériser les cellules leucémiques : la cytochimie utilise des colorations qui révèlent des caractéristiques enzymatiques ou biochimiques (par exemple, l'activité de la myéloperoxydase), et la cytométrie en flux multiparamétrique mesure plusieurs antigènes de surface et intracellulaires par cellule pour attribuer une lignée, définir l'immunophénotype et quantifier la maladie résiduelle.

Scope

Ce sujet aborde les méthodes utilisées pour caractériser les cellules leucémiques au-delà de la morphologie : les colorations cytochimiques classiques telles que la myéloperoxydase, et l'immunophénotypage par cytométrie en flux multiparamétrique moderne, y compris les panels d'anticorps standardisés et la détection de la maladie résiduelle mesurable (minimale). Il s'agit d'un matériel de référence sur la méthodologie de laboratoire, et non d'un protocole clinique.

Key concepts

• Myéloperoxydase et autres colorations cytochimiques
• Attribution de lignée par immunophénotype
• Cytométrie en flux multiparamétrique (multicolore)
• Panels d'anticorps standardisés
• Expression antigénique aberrante
• Gating et analyse de population
• Détection de la maladie résiduelle mesurable (minimale)

Mechanisms

Les colorations cytochimiques exploitent les enzymes et les constituants spécifiques aux cellules : l'activité de la myéloperoxydase, par exemple, marque la lignée myéloïde et aide à distinguer la leucémie myéloïde aiguë de la leucémie lymphoblastique aiguë sur un frottis coloré. La cytométrie en flux suspend les cellules dans un flux passant devant des lasers et enregistre la diffusion de la lumière et la fluorescence des marqueurs liés aux anticorps, permettant de mesurer de nombreux antigènes sur chaque cellule ; des combinaisons d'antigènes caractéristiques et aberrantes définissent la lignée et identifient la population leucémique. La même approche, appliquée avec une haute sensibilité à l'aide de panels standardisés, détecte de petites populations leucémiques résiduelles après traitement comme maladie résiduelle mesurable (van Dongen et al., 2012 ; Schuurhuis et al., 2018).

Clinical relevance

Ces techniques sous-tendent l'attribution de lignée et l'immunophénotypage sur lesquels repose la classification moderne des leucémies, et l'évaluation de la maladie résiduelle mesurable par cytométrie en flux est devenue un marqueur de réponse important dans la littérature. Cette entrée décrit les méthodes à un niveau de référence et ne constitue pas un guide pour l'interprétation des résultats d'un patient individuel.

Evidence & guidelines

Les efforts de standardisation, tels que les panels d'anticorps EuroFlow, définissent un immunophénotypage par cytométrie en flux reproductible, et le groupe de travail MRD de l'European LeukemiaNet fournit des critères consensuels pour l'évaluation de la maladie résiduelle mesurable dans la leucémie myéloïde aiguë ; les critères de lignée sont également intégrés dans la classification de l'OMS (van Dongen et al., 2012 ; Schuurhuis et al., 2018 ; Arber et al., 2016).

History

La coloration cytochimique était le moyen original d'affiner le diagnostic morphologique de la leucémie aiguë et d'attribuer une lignée. L'immunophénotypage par cytométrie en flux a ensuite largement supplanté la cytochimie pour l'attribution de lignée en mesurant de nombreux antigènes par cellule, et les initiatives de standardisation ainsi que les documents de consensus sur la maladie résiduelle mesurable ont ensuite étendu son rôle à une évaluation reproductible et de haute sensibilité (van Dongen et al., 2012 ; Schuurhuis et al., 2018).

Seminal works

• van-dongen-2012
• schuurhuis-2018

Frequently asked questions

Pourquoi la coloration à la myéloperoxydase est-elle utile dans la leucémie aiguë ?

La myéloperoxydase est un marqueur de la lignée myéloïde; sa présence sur une coloration cytochimique soutient donc un diagnostic de leucémie myéloïde aiguë et aide à la distinguer de la leucémie lymphoblastique aiguë.

Qu'est-ce que la détection de la maladie résiduelle mesurable par cytométrie en flux ?

Il s'agit de l'utilisation de la cytométrie en flux multiparamétrique à haute sensibilité pour détecter de petites populations de cellules leucémiques qui persistent après le traitement, en dessous du niveau visible par la morphologie de routine, comme marqueur de réponse.