میکروسکوپی و روشهای رنگآمیزی برای قارچها
میکروسکوپی مستقیم و رنگآمیزی به آزمایشگاه اجازه میدهد تا عناصر قارچی را در یک نمونه بدون انتظار برای کشت مشاهده کند. آمادهسازیهای مرطوب ساده، روشنکنندههای فلورسنت و رنگهای بافتی، هیفها، مخمرها و اسپورها را آشکار میسازند و شواهد سریعی از حضور قارچ و در بافت، از تهاجم آن ارائه میدهند.
Definition
روشهای میکروسکوپی و رنگآمیزی برای قارچها، تکنیکهایی هستند که ساختارهای قارچی را در نمونههای بالینی یا مقاطع بافتی قابل مشاهده میسازند، با استفاده از عوامل شفافکننده، متصلکنندههای فلورسنت دیواره سلولی، یا رنگهای هیستوشیمیایی برای نمایش هیفها، مخمرها و اسپورها تحت میکروسکوپ نوری یا فلورسنت.
Scope
این موضوع روشهای مشاهده قارچها را پوشش میدهد: لامهای مرطوب هیدروکسید پتاسیم که نمونهها را شفاف میکنند، رنگهای فلورسنت مانند کالکوفلور وایت که به دیواره سلولی قارچ متصل میشوند، و رنگهای هیستوپاتولوژیک مورد استفاده در مقاطع بافتی. همچنین به این موضوع میپردازد که مورفولوژی چه اطلاعاتی را میتواند و نمیتواند در مورد هویت به مشاهدهگر بدهد. این یک مرجع روش توصیفی است، نه یک پروتکل تشخیصی یا درمانی.
Core questions
- آیا عناصر قارچی در این نمونه وجود دارند و چه شکل مورفولوژیکی دارند؟
- کدام رنگ قارچها را در یک آمادهسازی مرطوب در مقابل یک مقطع بافتی بهتر نشان میدهد؟
- مورفولوژی به تنهایی تا چه حد میتواند هویت قارچ را محدود کند؟
- آیا میکروسکوپی تهاجم بافتی را در مقابل کلونیزاسیون سطحی نشان میدهد؟
Key concepts
- لام مرطوب هیدروکسید پتاسیم (KOH)
- رنگ فلورسنت کالکوفلور وایت
- رنگ اسید شیف پریودیک (PAS)
- رنگ متنامین نقره گروکوت-گوموری (GMS)
- هیفها، مخمرها و شبههیفها
- تهاجم بافتی در مقابل کلونیزاسیون
- محدودیتهای شناسایی مورفولوژیک
Mechanisms
در یک آمادهسازی KOH، هیدروکسید پتاسیم کراتین و سایر مواد میزبان را حل میکند و دیوارههای قارچی انکساری را زیر میکروسکوپ قابل مشاهده میسازد. روشنکنندههای فلورسنت مانند کالکوفلور وایت به کیتین و سلولز در دیواره سلولی قارچ متصل میشوند و تحت نور فرابنفش فلورسنس میدهند، که هیفها و مخمرها را به وضوح در برابر یک پسزمینه تاریک مشخص میکند. در بافت، رنگهای خاص از دیواره غنی از پلیساکارید بهره میبرند: اسید شیف پریودیک دیوارههای قارچی را به رنگ ارغوانی برجسته میکند، و متنامین نقره گروکوت-گوموری نقره را رسوب میدهد تا آنها را سیاه کند، که امکان مشاهده قارچها را در داخل مقاطع و، به طور حیاتی، قضاوت در مورد تهاجم به بافت را فراهم میآورد. مورفولوژی، الگوی شاخهشاخه شدن هیفها، وجود مخمرها یا شبههیفها، و سپتاسیون، تشخیص افتراقی را محدود میکند اما به ندرت برای گونه خاصی است، بنابراین میکروسکوپی با کشت، آنتیژن، یا روشهای مولکولی برای شناسایی قطعی همراه میشود.
Clinical relevance
میکروسکوپی برخی از سریعترین شواهد را مبنی بر وجود قارچ و در بافت، تهاجم آن ارائه میدهد، که برای تشخیص بیماری قارچی مهاجم حیاتی است. این مدخل روشها و محدودیتهای تفسیری آنها را به عنوان یک ماده مرجع توضیح میدهد؛ دستورالعملهایی در مورد آمادهسازی نمونه یا مدیریت بیماران ارائه نمیدهد.
Evidence & guidelines
بررسیهای هیستوپاتولوژی قارچی، رنگهای مورد استفاده برای نمایش قارچها در بافت و سرنخهای مورفولوژیک، و محدودیتهای شناسایی ارگانیسمها بر اساس ظاهر را مستند میکنند. توصیههای بهترین عملکرد برای تشخیص بیماریهای قارچی جدی، میکروسکوپی مستقیم و رنگآمیزی فلورسنت را به عنوان روشهای سریع خط مقدم که همراه با کشت و آزمایشهای مولکولی استفاده میشوند، قرار میدهند.
History
میکروسکوپی مستقیم از قدیمیترین روشهای قارچشناسی است، با لامهای مرطوب KOH که مدتها برای نشان دادن درماتوفیتها و سایر قارچها استفاده میشدند. رنگهای هیستوشیمیایی مانند متنامین نقره گروکوت-گوموری و روشهای اسید شیف پریودیک در قرن بیستم برای نمایش قارچها در بافت استاندارد شدند، و روشنکنندههای فلورسنت بعدها با درخشان کردن دیوارههای سلولی تحت نور فرابنفش، حساسیت را افزایش دادند.
Related topics
Seminal works
- guarner-2011
- dehoog-2020
Frequently asked questions
- آیا میکروسکوپی میتواند گونه دقیق قارچ را شناسایی کند؟
- معمولاً خیر. میکروسکوپی میتواند نشان دهد که قارچها وجود دارند و دستههای کلی مانند مخمرها یا کپکها را پیشنهاد کند، اما شناسایی دقیق گونه معمولاً به کشت، طیفسنجی جرمی یا توالییابی DNA نیاز دارد.
- چرا کالکوفلور وایت برای دیدن قارچها مفید است؟
- کالکوفلور وایت به اجزای دیواره سلولی قارچ متصل میشود و تحت نور فرابنفش فلورسنس میدهد، که حتی هیفها و مخمرهای پراکنده را به وضوح برجسته میکند و تشخیص را در مقایسه با یک لام مرطوب بدون رنگ افزایش میدهد.