میکروسکوپی و شناسایی مورفولوژیک

میکروسکوپی پایه و اساس کلاسیک انگل‌شناسی تشخیصی است: یک ناظر آموزش‌دیده نمونه‌های رنگ‌آمیزی شده یا تغلیظ شده را بررسی می‌کند و انگل‌ها را بر اساس مورفولوژی تخم‌ها، کیست‌ها، لاروها، تروفوزوئیت‌ها یا مراحل بالغ آن‌ها شناسایی می‌کند. با وجود ظهور آزمایش‌های آنتی‌ژن و مولکولی، شناسایی مورفولوژیک میکروسکوپی همچنان یک روش مرجع برای بسیاری از انگل‌های روده‌ای و خونی است، زیرا ارزان، دارای مشاهده مستقیم است و می‌تواند هم گونه‌ها را شناسایی کند و هم شدت عفونت را تخمین بزند.

Definition

میکروسکوپی و شناسایی مورفولوژیک، تشخیص بصری و شناسایی انگل‌ها در نمونه‌های بالینی در سطح گونه یا مرحله بر اساس ویژگی‌های ساختاری آن‌ها، با استفاده از میکروسکوپ نوری از آماده‌سازی‌های مرطوب، نمونه‌های تغلیظ شده، اسمیرهای رنگ‌آمیزی شده دائمی و لام‌های خونی است.

Scope

این موضوع رویکردهای اصلی میکروسکوپی مورد استفاده برای شناسایی و تشخیص انگل‌ها را پوشش می‌دهد: آماده‌سازی‌های مرطوب مستقیم، تغلیظ مدفوع، اسمیرهای رنگ‌آمیزی شده دائمی، و لام‌های خونی برای هموپارازیت‌ها، همراه با معیارهای مورفولوژیکی مورد استفاده برای تخصیص ارگانیسم‌ها به گونه و مرحله. این موضوع به نقاط قوت و محدودیت‌های میکروسکوپی به عنوان شواهد می‌پردازد و پروتکل‌های آزمایش بالینی یا راهنمایی‌های درمانی را ارائه نمی‌دهد.

Core questions

• کدام ویژگی‌های مورفولوژیکی یک گونه یا مرحله انگل را از یک گونه مشابه متمایز می‌کند؟
• چگونه تغلیظ و رنگ‌آمیزی دائمی، تشخیص عفونت‌های با تراکم پایین را بهبود می‌بخشد؟
• چه زمانی دفع متناوب نیاز به نمونه‌برداری مکرر برای یک نتیجه قابل اعتماد دارد؟
• حساسیت میکروسکوپی نسبت به روش‌های آنتی‌ژن و مولکولی برای یک ارگانیسم خاص چقدر است؟

Key concepts

• بررسی مستقیم آماده‌سازی مرطوب
• تغلیظ مدفوع (مثلاً رسوب‌گذاری فرمالین-اتیل استات)
• اسمیر رنگ‌آمیزی شده دائمی (مثلاً تریکروم)
• لام‌های خونی ضخیم و نازک برای هموپارازیت‌ها
• مورفولوژی تخم، کیست، لارو، تروفوزوئیت و بالغ
• مهارت ناظر و تغییرپذیری بین خوانندگان
• دفع متناوب و نیاز به نمونه‌های تکراری

Mechanisms

تشخیص به قابل مشاهده و قابل تمایز ساختن انگل‌ها بستگی دارد. آماده‌سازی‌های مرطوب امکان غربالگری سریع و مشاهده تحرک را فراهم می‌کنند؛ تکنیک‌های تغلیظ، تخم‌ها و کیست‌ها را از بقایای مدفوع جدا می‌کنند تا حساسیت را افزایش دهند؛ رنگ‌آمیزی‌های دائمی مانند تریکروم، ساختارهای داخلی را تثبیت و کنتراست می‌کنند تا گونه‌های پروتوزوآیی از یکدیگر متمایز شوند. برای انگل‌های خونی، لام‌های ضخیم برای غربالگری پارازیتمی پایین و لام‌های نازک مورفولوژی را برای شناسایی گونه حفظ می‌کنند. از آنجا که دفع کیست‌ها، تخم‌ها و میکروفیلاریاها می‌تواند متناوب و وابسته به تراکم باشد، حساسیت با تغلیظ نمونه و با بررسی چندین نمونه جمع‌آوری شده در روزهای مختلف افزایش می‌یابد.

Clinical relevance

شناسایی مورفولوژیک با میکروسکوپی، تأیید بسیاری از عفونت‌های انگلی را پشتیبانی می‌کند و یک صلاحیت کلیدی در پزشکی آزمایشگاهی باقی می‌ماند، به ویژه در مواردی که می‌تواند همزمان گونه‌ها را شناسایی کرده و شدت عفونت را اندازه‌گیری کند. این مدخل روش و محدودیت‌های آن را به عنوان منبع شواهد توصیف می‌کند و جایگزینی برای رویه‌های استاندارد عملیاتی آزمایشگاهی یا قضاوت بالینی نیست.

Epidemiology

میکروسکوپی زیربنای بسیاری از انگل‌شناسی در سطح جمعیت است، اما کارهای متاآنالیتیک نشان می‌دهد که حساسیت آن برای کرم‌های منتقل شده از خاک ناقص است و در شدت‌های پایین عفونت کاهش می‌یابد، که این امر مقایسه رسمی با جایگزین‌های مولکولی و مبتنی بر آنتی‌ژن و استفاده از مدل‌های آماری را که هیچ آزمایشی را به عنوان یک استاندارد طلایی کامل فرض نمی‌کنند، ضروری ساخته است.

History

شناسایی میکروسکوپی انگل‌شناسی را از قرن نوزدهم به بعد تعریف کرد، زیرا مورفولوژی و چرخه‌های زندگی پروتوزوآ و کرم‌ها به تدریج توصیف شدند. استانداردسازی کمی‌سازی مدفوع با روش‌های اسمیر ضخیم در اوایل دهه ۱۹۷۰ و تدوین روش‌های تغلیظ و رنگ‌آمیزی، میکروسکوپی را به یک رشته تشخیصی قابل تکرار تبدیل کرد که همچنان در استفاده روزمره باقی مانده است.

Debates

آیا میکروسکوپی باید با توجه به حساسیت متغیر آن، استاندارد مرجع باقی بماند؟

میکروسکوپی وابسته به اپراتور است و می‌تواند عفونت‌های با شدت پایین را از دست بدهد، بنابراین نقش دیرینه آن به عنوان مقایسه‌ای که آزمایش‌های جدید بر اساس آن قضاوت می‌شوند، مورد سوال قرار گرفته است؛ متاآنالیزها در غیاب یک استاندارد طلایی واقعی نشان می‌دهند که حساسیت آن باید تخمین زده شود تا اینکه کامل فرض شود.

Seminal works

• garcia-2018
• katz-1972
• ndao-2009

Frequently asked questions

چرا اغلب بیش از یک نمونه مدفوع بررسی می‌شود؟

بسیاری از پروتوزوآها و کرم‌های روده‌ای کیست‌ها، تخم‌ها یا لاروها را به صورت متناوب دفع می‌کنند، بنابراین یک نمونه واحد می‌تواند عفونت را از دست بدهد؛ بررسی چندین نمونه جمع‌آوری شده در روزهای مختلف شانس تشخیص را افزایش می‌دهد.

تفاوت بین لام خونی ضخیم و نازک چیست؟

لام ضخیم خون را تغلیظ می‌کند تا انگل‌های با تراکم پایین مانند مالاریا را غربالگری کند اما مورفولوژی را مخدوش می‌کند، در حالی که لام نازک مورفولوژی انگل و گلبول قرمز را حفظ می‌کند تا امکان شناسایی گونه فراهم شود.