ایمونوهیستوشیمی و ایمونوفلورسانس
ایمونوهیستوشیمی (IHC) و ایمونوفلورسانس از آنتیبادیها برای مکانیابی مولکولهای خاص در یک برش بافتی استفاده میکنند. یک آنتیبادی به آنتیژن هدف خود درجا متصل میشود و سپس قابل مشاهده میگردد — توسط آنزیمی که محصول رنگی رسوب میدهد (IHC) یا توسط یک برچسب فلورسنت که زیر میکروسکوپ فلورسنت مشاهده میشود (ایمونوفلورسانس) — که امکان شناسایی انواع سلولها و مولکولهایی را فراهم میکند که رنگآمیزیهای معمول قادر به تمایز آنها نیستند.
Definition
ایمونوهیستوشیمی و ایمونوفلورسانس روشهای مبتنی بر آنتیبادی هستند که آنتیژنهای خاص را در برشهای بافتی با اتصال آنتیبادیهای نشاندار به اهدافشان و تشخیص نشاندار متصل شده از طریق واکنشهای رنگی آنزیمی (ایمونوهیستوشیمی) یا فلورسانس (ایمونوفلورسانس) مکانیابی میکنند.
Scope
این موضوع اصول برچسبگذاری مبتنی بر آنتیبادی، تشخیص مستقیم و غیرمستقیم، سیستمهای تقویت سیگنال، بازیابی آنتیژن، و اعتبارسنجی و کنترل کیفیت این آزمایشها را پوشش میدهد. این یک مرجع روششناختی است و تفسیر بالینی یا راهنمایی درمانی ارائه نمیدهد.
Core questions
- چگونه یک آنتیبادی به مکانیابی مولکول-اختصاصی در بافت دست مییابد؟
- طرحهای تشخیص مستقیم و غیرمستقیم چه تفاوتی با هم دارند؟
- سیستمهای تقویتکننده و بازیابی آنتیژن چگونه حساسیت را بهبود میبخشند؟
- آزمایشهای مبتنی بر آنتیبادی چگونه برای تفسیر قابل اعتماد اعتبارسنجی و کنترل میشوند؟
Key concepts
- اختصاصیت اتصال آنتیژن-آنتیبادی
- تشخیص مستقیم در مقابل غیرمستقیم
- تقویت سیگنال (مانند آویدین-بیوتین، سیستمهای پلیمری)
- نشاندارهای کروموژنیک در مقابل فلورسنت
- بازیابی آنتیژن (اپیتوپ)
- کنترلها و اعتبارسنجی آزمایش
- اختصاصیت و واکنشپذیری متقاطع
Mechanisms
رویداد اصلی، اتصال اختصاصی یک آنتیبادی به آنتیژن خود در داخل برش است. در روش مستقیم، خود آنتیبادی اولیه حامل نشاندار است؛ در روش غیرمستقیم، یک آنتیبادی اولیه بدون نشاندار توسط یک آنتیبادی ثانویه نشاندار شناسایی میشود که هم تشخیص را تقویت و هم استاندارد میکند. کوونز و همکارانش برای اولین بار نشان دادند که یک آنتیبادی نشاندار شده با یک گروه فلورسنت میتواند آنتیژن خود را در بافت مکانیابی کند (Coons, 1941)، که ایمونوفلورسانس را پایهگذاری کرد. سپس تشخیص مبتنی بر آنزیم سیگنالهای کروموژنیک دائمی را امکانپذیر ساخت و حساسیت با سیستمهای تقویتکننده مانند کمپلکس آویدین-بیوتین-پراکسیداز (Hsu et al., 1981) و بعدها، تشخیص مبتنی بر پلیمر افزایش یافت. از آنجایی که تثبیت با آلدئید میتواند اپیتوپها را از طریق اتصال عرضی پنهان کند، مراحل بازیابی آنتیژن مبتنی بر حرارت یا پروتئاز اغلب برای بازگرداندن اتصال آنتیبادی در بافتهای تثبیت شده با فرمالین و پارافینگذاری شده استفاده میشود (Shi et al., 1991). تفسیر قابل اعتماد به کنترلهای مثبت و منفی مناسب و اعتبارسنجی تحلیلی رسمی هر آزمایش بستگی دارد (Fitzgibbons et al., 2014).
Clinical relevance
برچسبگذاری مبتنی بر آنتیبادی اساس بسیاری از تشخیصها و تحقیقات مدرن مبتنی بر بافت را با شناسایی رده سلولی و نشانگرهای مولکولی خاص تشکیل میدهد. این مدخل روشها و الزامات کیفی آنها را به صورت مفهومی توصیف میکند؛ این یک جهتگیری مرجع است و مبنایی برای تصمیمات تشخیصی یا درمانی فردی نیست.
Evidence & guidelines
راهنماییهای حرفهای در مورد اعتبارسنجی تحلیلی آزمایشهای ایمونوهیستوشیمی توسط کالج آسیبشناسان آمریکا (Fitzgibbons et al., 2014) صادر شده است و اصول روش در مراجع استاندارد هیستوتکنولوژی (Suvarna et al., 2018) تثبیت شدهاند. روشهای بازیابی و تقویت آنتیژن از مطالعات اولیه بنیادی (Shi et al., 1991; Hsu et al., 1981) نشأت میگیرند.
History
مکانیابی مبتنی بر آنتیبادی با روش آنتیبادی فلورسنت کوونز و همکارانش در سال 1941 آغاز شد که تشخیص مولکول-اختصاصی در بافت را ممکن ساخت. روشهای نشاندار آنزیمی بعدها سیگنالهای مرئی دائمی ایجاد کردند، سیستمهای تقویتکننده مانند کمپلکس آویدین-بیوتین-پراکسیداز (Hsu et al., 1981) حساسیت را افزایش دادند، و بازیابی آنتیژن القا شده با حرارت (Shi et al., 1991) ایمونواستینینگ قابل اعتماد را به مواد تثبیت شده روتین و پارافینگذاری شده گسترش داد. استانداردسازی و راهنمایی اعتبارسنجی به دنبال آن آمد که این روشها به بخش مرکزی عمل تشخیصی تبدیل شدند (Fitzgibbons et al., 2014).
Key figures
- Albert Coons
- Su-Ming Hsu
- Shan-Rong Shi
Related topics
Seminal works
- coons-1941
- hsu-1981
- shi-1991
Frequently asked questions
- تفاوت بین ایمونوهیستوشیمی و ایمونوفلورسانس چیست؟
- هر دو از آنتیبادیها برای مکانیابی آنتیژنها در بافت استفاده میکنند؛ ایمونوهیستوشیمی آنتیبادی متصل شده را از طریق آنزیمی که یک محصول رنگی قابل مشاهده با میکروسکوپ نوری رسوب میدهد، تجسم میکند، در حالی که ایمونوفلورسانس از یک نشاندار فلورسنت که زیر میکروسکوپ فلورسنت مشاهده میشود، استفاده میکند.
- چرا اغلب به بازیابی آنتیژن نیاز است؟
- تثبیت با فرمالین پروتئینها را به صورت عرضی متصل میکند و میتواند اپیتوپهایی را که آنتیبادیها شناسایی میکنند، پنهان کند؛ مراحل بازیابی آنتیژن مبتنی بر حرارت یا آنزیم میتوانند این اپیتوپها را آشکار کنند تا رنگآمیزی در بافتهای تثبیت شده با فرمالین و پارافینگذاری شده امکانپذیر شود.