کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا

کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) اجزای عصاره گیاهی را در ستونی پرشده تحت فشار بالا جدا می‌کند، با آشکارسازهایی که هم پروفایل‌های اثر انگشت مشخصه و هم اندازه‌گیری دقیق ترکیبات نشانگر را امکان‌پذیر می‌سازند. این روش اصلی ابزاری برای استانداردسازی کمی مواد گیاهی و ابزاری محوری در کنترل کیفیت فارماکوگنوزی مدرن است.

Definition

کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا یک تکنیک جداسازی ستونی است که در آن یک فاز متحرک مایع، اجزای نمونه را از طریق یک فاز ثابت پرشده تحت فشار بالا حمل می‌کند و آن‌ها را برای تشخیص تفکیک می‌کند تا بتوان آن‌ها را با زمان ماندگاری و الگو شناسایی کرد و در برابر استانداردهای مرجع کمی‌سازی نمود.

Scope

این مدخل شامل اصول کروماتوگرافی مایع ستونی، استفاده از HPLC برای انگشت‌نگاری و برای سنجش کمی اجزای نشانگر در داروهای خام و عصاره‌ها، و جایگاه آن در میان روش‌های کروماتوگرافی کنترل کیفیت است. این یک مرجع روش‌شناختی است و نه راهنمای بالینی.

Core questions

• آیا پروفایل HPLC یک نمونه با اثر انگشت مرجع برای ماده اعلام شده مطابقت دارد؟
• محتوای کمی نشانگر یا اجزای فعال نسبت به مشخصات چقدر است؟
• آیا کروماتوگرام تقلب، جایگزینی، یا اجزای خارج از حد مجاز را نشان می‌دهد؟

Key concepts

• کروماتوگرافی مایع ستونی تحت فشار بالا
• فازهای ثابت و متحرک؛ جداسازی فاز معکوس
• زمان ماندگاری و تفکیک‌پذیری
• آشکارسازها (UV/DAD, MS, ELSD)
• سنجش کمی در برابر استانداردهای مرجع
• انگشت‌نگاری HPLC و ترکیبات نشانگر
• تحلیل شیمی‌سنجی اثر انگشت‌ها

Mechanisms

یک پمپ، فاز متحرک مایع حاوی نمونه حل شده را از طریق ستونی پرشده با ذرات ریز فاز ثابت به حرکت در می‌آورد؛ اجزا بر اساس تفاوت در توزیع بین فازها جدا شده و در زمان‌های ماندگاری مشخصه شسته می‌شوند. آشکارسازهایی مانند فرابنفش یا آرایه دیودی، طیف‌سنجی جرمی، یا دستگاه‌های پراکندگی نور تبخیری، پیک‌های شسته‌شده را ثبت می‌کنند و هم یک پروفایل اثر انگشت و هم، با کالیبراسیون در برابر استانداردهای مرجع، محتوای کمی اجزای نشانگر را تولید می‌کنند. ترکیب اثر انگشت کیفی با سنجش کمی—که اغلب با تکنیک‌های شیمی‌سنجی تفسیر می‌شود—مبنای قدرتمندی برای کنترل هویت، سازگاری و محتوای مواد گیاهی فراهم می‌کند (xie-2006, liang-2010, who-2011-qc).

Clinical relevance

HPLC از تأیید هویت و اندازه‌گیری دقیق نشانگر یا اجزای فعال در مواد گیاهی پشتیبانی می‌کند، که برای مستندسازی سازگاری و کیفیت دسته‌ای محوری است. این مدخل یک روش تحلیلی را توصیف می‌کند و مبنایی برای تصمیم‌گیری‌های درمانی فردی نیست.

Evidence & guidelines

راهنمای کنترل کیفیت WHO و مونوگراف‌های فارماکوپه‌ای از HPLC برای شناسایی و سنجش کمی مواد گیاهی استفاده می‌کنند، و بررسی‌های انگشت‌نگاری کروماتوگرافی، HPLC را، اغلب با شیمی‌سنجی، به عنوان یک رویکرد پیشرو برای ارزیابی کیفیت گیاهی معرفی می‌کنند (who-2011-qc, xie-2006, liang-2010, evans-2009).

History

کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا از کروماتوگرافی ستونی کلاسیک در اواخر قرن بیستم توسعه یافت و به روش جداسازی کمی غالب در تحلیل دارویی تبدیل شد؛ کاربرد آن در انگشت‌نگاری و کمی‌سازی نشانگرها آن را به سنگ بنای استانداردسازی داروهای گیاهی تبدیل کرد، که به طور فزاینده‌ای با طیف‌سنجی جرمی و تحلیل داده‌های شیمی‌سنجی همراه شد (xie-2006, liang-2010, evans-2009).

Seminal works

• xie-2006
• liang-2010

Frequently asked questions

چرا HPLC برای استانداردسازی کمی ترجیح داده می‌شود؟

زیرا اجزا را در یک ستون با آشکارسازهای حساس تفکیک می‌کند و می‌تواند در برابر استانداردهای مرجع کالیبره شود، محتوای ترکیبات نشانگر یا فعال را به دقت اندازه‌گیری می‌کند، کاری که روش‌های کیفی ساده‌تر قادر به انجام آن نیستند.

اثر انگشت HPLC چیست؟

این الگوی مشخصه پیک‌ها در زمان‌های ماندگاری تعریف شده است که توسط یک عصاره تولید می‌شود؛ مقایسه این پروفایل با یک مرجع به تأیید هویت و سازگاری کمک می‌کند و می‌تواند با تکنیک‌های شیمی‌سنجی تحلیل شود.