تثبيت العينات وصبغها

التثبيت والصبغ هما الخطوتان الكيميائيتان اللتان تحولان العينة الخلوية المترسبة إلى شريحة قابلة للتفسير. يعمل التثبيت على تثبيت الخلايا والحفاظ على تركيبها الداخلي؛ ثم يمنح الصبغ الألوان والتباين التي تمكن أخصائي علم الأمراض الخلوي من تمييز النواة عن السيتوبلازم وقراءة تفاصيل الكروماتين. يعد اختيار طريقة التثبيت مع الصبغة قرارًا مدروسًا يحدد الميزات الخلوية التي يتم التركيز عليها.

Definition

تثبيت العينات وصبغها هي الخطوات التحضيرية التي تحافظ على الشكل الخلوي (التثبيت) وتضفي لونًا انتقائيًا على المكونات الخلوية (الصبغ) بحيث يمكن قراءة الشريحة الخلوية تحت المجهر.

Scope

يشرح هذا المدخل سبب وكيفية تثبيت العينات الخلوية (التثبيت الرطب مقابل التجفيف المتعمد بالهواء)، ومبادئ الصبغات الخلوية الرئيسية، وكيفية مطابقة مجموعة التثبيت والصبغ مع السؤال التشخيصي. إنه مرجع على مستوى الأساليب ولا يقدم أي تعليمات خاصة بالمريض.

Key concepts

• تثبيت الكحول المخثر والتثبيت الرطب
• التجفيف المتعمد بالهواء كحالة تحضيرية
• صبغ النواة مقابل صبغ السيتوبلازم
• صبغة بابانيكولاو (شفافة، متعددة الألوان)
• صبغات رومانوفسكي للطاخات المجففة بالهواء
• القطع الأثرية الناتجة عن التجفيف وتأثيرها على تفاصيل النواة
• تغطية الشرائح، التوضيح، وديمومة الشريحة

Mechanisms

يوقف التثبيت التحلل الذاتي ويثبت البروتينات الخلوية والأحماض النووية في مكانها. في علم الخلايا، المثبت السائد هو الإيثانول أو رذاذ قائم على الكحول يطبق بينما تكون اللطاخة لا تزال رطبة (التثبيت الرطب)، مما يحافظ على الكروماتين النووي الدقيق اللازم لصبغة بابانيكولاو. بدلاً من ذلك، يُسمح للطاخة بالجفاف في الهواء، وهي حالة تسطح الخلايا وتكبرها وتعد التحضير المطلوب لصبغات رومانوفسكي. يستغل الصبغ بعد ذلك ألفة الأصباغ المشحونة للمكونات الخلوية: ترتبط الأصباغ القاعدية (الكاتيونية) بالكروماتين النووي الحمضي، بينما تلون الأصباغ الحمضية (الأنيونية) البروتينات السيتوبلازمية. تجمع صبغة بابانيكولاو بين الهيماتوكسيلين النووي والعديد من الصبغات المضادة لتعطي خلايا شفافة ومتعددة الألوان؛ تجمع صبغات رومانوفسكي بين أصباغ الأزرق والأيوزين التي ينتج تفاعلها الكروماتين الأرجواني المميز والألوان المتباينة (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982; Koss & Melamed 2006).

Clinical relevance

نظرًا لأن التثبيت والصبغ يحددان وضوح السمات المستخدمة لتصنيف الخلايا، فإنهما لا ينفصلان عن التشخيص الخلوي وإعداد التقارير. يصف هذا المدخل الأساليب ومنطقها كخلفية لفهم الممارسة المخبرية؛ وهو ليس أساسًا للقرارات السريرية الفردية.

Evidence & guidelines

تثبت الأدبيات المنهجية الأدوار التكميلية لعائلتي الصبغات العظيمتين - صبغة بابانيكولاو المثبتة بالكحول لتفاصيل النواة والكروماتين وصبغات رومانوفسكي المجففة بالهواء لسمات السيتوبلازم والخلفية - وقد حدد عمل فيتيكيند (Wittekind) مزيجًا من أزرق B-إيوزين Y كصبغة رومانوفسكي-جيمسا مرجعية (Wittekind 1982; Bibbo & Wilbur 2014). تؤكد النصوص المرجعية أن توقيت التثبيت وجودته هما المحددان الرئيسيان القابلان للتحكم لنتائج الصبغ والقطع الأثرية مثل تشوه النواة الناتج عن التجفيف (Koss & Melamed 2006).

History

نشأ الصبغ الخلوي من الكيمياء النسيجية في القرن التاسع عشر وصبغات أمراض الدم لرومانوفسكي وجيمسا، ثم تحول لعلم الخلايا التقشيري بواسطة صبغة بابانيكولاو الشفافة متعددة الألوان للطاخات المثبتة رطبًا في الأربعينيات. سعت أعمال أواخر القرن العشرين، بما في ذلك دراسات توحيد الأصباغ لفيتيكيند، إلى جعل صبغ رومانوفسكي قابلاً للتكرار عبر المختبرات (Papanicolaou 1942; Wittekind 1982).

Key figures

• George Papanicolaou
• Dietrich Wittekind

Seminal works

• papanicolaou-1942
• wittekind-1982
• koss-melamed-2006

Frequently asked questions

لماذا يجب تثبيت بعض لطاخات الخلايا وهي لا تزال رطبة؟

يحافظ التثبيت الرطب (بالكحول) على تفاصيل الكروماتين النووي الدقيقة التي تعتمد عليها صبغة بابانيكولاو. إذا جفت هذه اللطاخة قبل التثبيت، فإن القطع الأثرية الناتجة عن التجفيف تشوه النوى وتقلل من جودة التفسير.

ما الذي يحدد الصبغة التي تتلقاها عينة الخلايا؟

يتحدد ذلك بحالة التثبيت والسؤال التشخيصي: تأخذ اللطاخات المثبتة رطبًا صبغة بابانيكولاو لتفاصيل النواة، بينما تأخذ اللطاخات المجففة عمدًا بالهواء صبغة رومانوفسكي التي تبرز سمات السيتوبلازم والخلفية.