تحديد المتفطرات ومقاومتها

يُعد تحديد المتفطرات واختبار مقاومتها من الطرق المخبرية المستخدمة للكشف عن المتفطرة السلية (Mycobacterium tuberculosis) وغيرها من المتفطرات، وتحديد أنواعها، وتحديد مدى حساسيتها للأدوية المضادة للمتفطرات. ونظرًا لبطء نمو المتفطرات، يجمع هذا المجال بين الفحص المجهري والزرع مع الفحوصات الجزيئية السريعة التي يمكنها الكشف عن الكائن الحي وعلامات المقاومة الرئيسية.

Definition

تحديد المتفطرات هو الكشف المخبري وتحديد مستوى الأنواع للمتفطرات من عينة سريرية؛ واختبار المقاومة هو تحديد حساسية عزل المتفطرات للعوامل المضادة للمتفطرات، سواء بالطرق المظهرية أو الجزيئية.

Scope

يغطي هذا المدخل الفحص المجهري للصبغة المقاومة للحمض، وزرع المتفطرات، وتحديد الأنواع، واختبار حساسية الأدوية المظهرية والجزيئية، والكشف الجزيئي السريع للمقاومة مثل مقاومة الريفامبيسين في السل. ويتناول هذه الطرق كطرق مخبرية ولا يقدم أنظمة علاجية أو جرعات.

Core questions

• هل توجد متفطرات في هذه العينة، وهل الكائن الحي هو المتفطرة السلية أم نوع غير سُلي؟
• ما هي الطرق - الفحص المجهري للصبغة المقاومة للحمض، الزرع، الفحوصات الجزيئية، أو التحديد البروتيني - التي تكشف وتحدد المتفطرات؟
• هل العزلة مقاومة للأدوية الرئيسية المضادة للمتفطرات، وكيف يتم تحديد ذلك مظهريًا أو جزيئيًا؟
• كيف يؤثر النمو البطيء للمتفطرات وسرعة الفحوصات الجزيئية على سير العمل المخبري؟

Key concepts

• الفحص المجهري للصبغة المقاومة للحمض (زيل-نيلسن، أورامين)
• زرع المتفطرات (أوساط صلبة وسائلة)
• معقد المتفطرة السلية مقابل المتفطرات غير السلية
• اختبار حساسية الأدوية المظهري
• الكشف الجزيئي للمقاومة (مثل مقاومة الريفامبيسين)
• تضخيم الحمض النووي للكشف المباشر
• فحوصات المجسات الخطية والقائمة على الخراطيش
• النمو البطيء ووقت الاستجابة

Mechanisms

يبدأ الكشف عن المتفطرات بالفحص المجهري للصبغة المقاومة للحمض، الذي يصبغ الجدار الخلوي الغني بالدهون، وبالزرع على أوساط صلبة أو سائلة، والذي قد يستغرق أسابيع نظرًا لبطء نمو المتفطرات. يميز تحديد الأنواع معقد المتفطرة السلية عن المتفطرات غير السلية باستخدام المجسات الجزيئية، أو التسلسل، أو الطرق البروتينية مثل مطياف الكتلة (Clark et al., 2013). يتم اختبار حساسية الأدوية مظهريًا عن طريق النمو في وجود الأدوية أو، بشكل متزايد، عن طريق الكشف الجزيئي عن الطفرات المرتبطة بالمقاومة. يمكن لتضخيم الحمض النووي الآلي القائم على الخراطيش الكشف عن المتفطرة السلية ومقاومة الريفامبيسين مباشرة من العينة في غضون ساعات بدلاً من الأسابيع اللازمة للاختبار القائم على الزرع (Boehme et al., 2010)، ويدعم تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي الكشف الجزيئي المباشر في المختبر على نطاق أوسع (Espy et al., 2006). تضع المراجعات الشاملة هذه الطرق المخبرية ضمن المشهد التشخيصي والترصدي الأوسع للسل (Pai et al., 2016).

Clinical relevance

يؤدي تحديد المتفطرات والكشف عن مقاومة الأدوية إلى إنتاج معلومات أساسية للتفكير السريري حول السل وأمراض المتفطرات غير السلية وللتحكم في الصحة العامة. يصف هذا المدخل كيفية توليد هذه النتائج المخبرية وما يحد منها؛ وهو مادة مرجعية ولا يصف أنظمة أو جرعات مضادة للمتفطرات لفرد معين.

Epidemiology

يُعد الاختبار المخبري للمتفطرات جزءًا لا يتجزأ من مكافحة السل: فالكشف الجزيئي السريع عن الكائن الحي وعن المقاومة يختصر الطريق إلى التعرف على السل المقاوم للأدوية ويوفر معلومات للترصد (Boehme et al., 2010). تؤكد مراجعات السل على دور التشخيص في الوبائيات العالمية وإدارة المرض (Pai et al., 2016).

History

اعتمد تشخيص المتفطرات لأكثر من قرن على الفحص المجهري للصبغة المقاومة للحمض والزرع البطيء، مع إضافة اختبار حساسية الأدوية المظهري لاحقًا. شكل إدخال تضخيم الحمض النووي، ولا سيما الفحوصات الآلية القائمة على الخراطيش القادرة على الإبلاغ عن المتفطرة السلية ومقاومة الريفامبيسين مباشرة من البلغم في غضون ساعات، تغييرًا كبيرًا في الممارسة المخبرية (Boehme et al., 2010)، ضمن التوسع الأوسع في علم الأحياء الدقيقة الجزيئي (Espy et al., 2006).

Seminal works

• boehme-2010
• pai-2016
• espy-2006

Frequently asked questions

لماذا يعتمد اختبار المتفطرات على كل من طرق الزرع والطرق الجزيئية؟

تنمو المتفطرات ببطء، لذا فإن تحديد الأنواع واختبار الحساسية القائم على الزرع يمكن أن يستغرق أسابيع. تكشف الفحوصات الجزيئية عن الكائن الحي وعلامات المقاومة الرئيسية، مثل مقاومة الريفامبيسين، مباشرة من العينة في غضون ساعات، مما يكمل الزرع (Boehme et al., 2010).

ما الذي يميز المتفطرة السلية عن المتفطرات غير السلية في المختبر؟

كلاهما مقاوم للحمض، لذا لا يمكن للفحص المجهري وحده التمييز بينهما؛ يستخدم تحديد مستوى الأنواع المجسات الجزيئية، أو التسلسل، أو الطرق البروتينية لتمييز معقد المتفطرة السلية عن المتفطرات غير السلية (Clark et al., 2013).