تقنيات التشخيص الجزيئي
تكتشف تقنيات التشخيص الجزيئي البكتيريا وتصنفها بناءً على أحماضها النووية بدلاً من نموها، وذلك باستخدام طرق مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل والتسلسل. يمكنها تحديد الكائنات الحية مباشرة من العينات، وغالبًا ما تكون أسرع من الزراعة، وأحيانًا عندما تفشل الزراعة، ويمكنها الكشف عن محددات المقاومة.
Definition
تقنيات التشخيص الجزيئي هي طرق مخبرية تكتشف أو تضخم أو تسلسل الأحماض النووية الميكروبية لتحديد الكائنات الحية أو محددات المقاومة، وعادةً لا تتطلب زراعة الكائن الحي.
Scope
يغطي هذا الموضوع اختبارات تضخيم الحمض النووي، وتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي والمتعدد، والتحديد القائم على التسلسل، واللوحات الجزيئية المتلازمية، بالإضافة إلى نقاط قوتها ومحاذيرها التفسيرية. يتم تأطيره كموضوع منهجي ولا يقدم تعليمات اختبار أو علاج للمرضى الأفراد.
Core questions
- كيف تكتشف اختبارات تضخيم الحمض النووي البكتيريا؟
- متى يمكن للطرق الجزيئية أن تنجح حيث تفشل الزراعة، وما هي حدودها؟
- كيف تكمل التشخيصات الجزيئية والقائمة على الزراعة بعضها البعض؟
Key concepts
- اختبار تضخيم الحمض النووي
- تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي (الكمي)
- اللوحات المتعددة والمتلازمية
- تسلسل جين 16S rRNA
- الكشف عن جينات المقاومة
- الكشف عن الكائنات غير القابلة للحياة
- الحساسية والنوعية التحليلية
Mechanisms
تستهدف الطرق الجزيئية تسلسلاً معينًا من الحمض النووي وتضخمه بحيث يمكن اكتشاف كميات صغيرة جدًا من الكائن الحي؛ وتقوم التنسيقات في الوقت الفعلي بتحديد كمية الهدف وتقصير وقت الاستجابة، بينما تختبر اللوحات المتعددة العديد من مسببات الأمراض في وقت واحد (Espy 2006). يمكن أن يؤدي تسلسل الجينات المحفوظة مثل 16S rRNA إلى تحديد الكائنات الحية التي يصعب زراعتها أو تحديد نمطها الظاهري. نظرًا لأن هذه الطرق تكتشف الحمض النووي بدلاً من النمو، فإنها يمكن أن تعطي نتائج عندما تكون الزراعة سلبية، بما في ذلك بعد التعرض للمضادات الحيوية، ولكنها قد تكتشف أيضًا كائنات غير قابلة للحياة أو مستعمرات، لذا تتطلب النتائج تفسيرًا في السياق. تصف المراجعات كيف حسنت التشخيصات الجزيئية السرعة والحساسية مع إثارة أسئلة تفسيرية جديدة (Espy 2006; Caliendo 2013).
Clinical relevance
تؤثر التشخيصات الجزيئية على مدى سرعة وموثوقية إسناد العدوى إلى الكائنات الحية وكيفية اكتشاف المقاومة، ولكن تفسيرها يختلف عن الزراعة لأن اكتشاف جين ليس هو نفسه استعادة كائن حي قابل للحياة وقابل للاختبار الحساسية. يصف الموضوع كيفية توليد الأدلة المخبرية وليس أساسًا لقرارات التشخيص أو العلاج الفردية.
Evidence & guidelines
تصف المراجعات الشاملة تطبيقات وأداء تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي والطرق الجزيئية الأخرى في علم الأحياء الدقيقة السريري الروتيني (Espy 2006) والتحول الأوسع نحو تشخيصات الأمراض المعدية المحسنة (Caliendo 2013)؛ وتفصل النصوص القياسية الطرق الجزيئية ومكانتها جنبًا إلى جنب مع الزراعة (Jorgensen 2015).
History
جعل تفاعل البوليميراز المتسلسل، الذي تم تقديمه في الثمانينيات، الكشف المستهدف عن الحمض النووي عمليًا، ثم دخلت التنسيقات في الوقت الفعلي والمتعدد المختبرات السريرية الروتينية، مما وسع التشخيص الجزيئي والتحديد القائم على التسلسل (Espy 2006; Caliendo 2013).
Related topics
Seminal works
- espy-2006
- caliendo-2013
Frequently asked questions
- هل يمكن للاختبارات الجزيئية أن تحل محل الزراعة؟
- ليس بالكامل؛ غالبًا ما تكتشف الكائنات الحية بشكل أسرع وأحيانًا عندما تفشل الزراعة، لكن الزراعة لا تزال توفر عزلة قابلة للحياة لمزيد من التوصيف، وتتطلب النتائج الجزيئية التي تكتشف الحمض النووي تفسيرًا دقيقًا.
- لماذا قد يكون الاختبار الجزيئي إيجابيًا بينما تكون الزراعة سلبية؟
- تكتشف الطرق الجزيئية الحمض النووي بدلاً من النمو، لذا يمكن أن تظل إيجابية عندما تكون الكائنات غير قابلة للحياة أو موجودة بأعداد قليلة، بما في ذلك بعد التعرض للمضادات الحيوية التي تمنع استعادة الزراعة.