Sitolojide Floresan İn Situ Hibridizasyon (FISH)
Floresan in situ hibridizasyon (FISH), hücre çekirdeklerindeki tamamlayıcı dizilere bağlanan floresan etiketli DNA probları kullanmaktadır; bu sayede belirli kromozomal bölgeler veya genler floresan mikroskop altında görünür hale gelmektedir. Sitolojik örneklere uygulandığında, anöploidi, gen amplifikasyonları, delesyonlar ve yeniden düzenlenmeleri doğrudan sağlam hücrelerde tespit edebilmekte, morfolojik değerlendirmeye sitogenetik bir boyut katmaktadır.
Tanım
FISH, sitolojik bir preparat üzerindeki hücrelerdeki spesifik DNA hedeflerine floresan etiketli nükleik asit problarının hibridize olduğu, kromozomal kopya sayısı değişikliklerinin ve yapısal yeniden düzenlenmelerin görselleştirilmesine olanak tanıyan yardımcı bir sitogenetik tekniktir.
Kapsam
Bu madde, sitolojik preparatlarda prob hibridizasyonunun prensibini, FISH'in çözebileceği genomik anormallik türlerini ve idrar ile bronşiyal örneklerdeki çok hedefli testler gibi yerleşik sitolojik uygulamalarını kapsamaktadır. Bu bir metodolojik referanstır ve test veya yorumlama protokolleri sunmamaktadır.
Temel sorular
- Belirli bir sitolojik örnekte FISH hangi kromozomal veya gen düzeyindeki anormallikleri çözebilmektedir?
- Prob tasarımı ve sinyal sayım kriterleri pozitif bir sonucu nasıl belirlemektedir?
- FISH, şüpheli veya atipik örneklerde sitolojik morfolojiyi nasıl tamamlamaktadır?
Anahtar kavramlar
- Diziye özgü prob hibridizasyonu
- Sentromerik, lokus-spesifik ve ayrılma (break-apart) probları
- Anöploidi ve kopya sayısı tespiti
- Çok hedefli prob panelleri (örn. UroVysion)
- Sinyal sayımı ve skorlama eşikleri
- Lamlar üzerindeki sağlam hücrelere uygulama
Mekanizmalar
Bir florofor tarafından taşınan denatüre tek sarmallı prob DNA'sı, bir lam üzerine sabitlenmiş hücrelerin denatüre nükleer DNA'sı içindeki tamamlayıcı hedef dizisine tavlanmaktadır; bağlanmamış prob yıkandıktan sonra, bağlı sinyaller floresan mikroskopi altında sayılmaktadır. Sentromerik problar kromozom kopya sayısını bildirmekte, lokus-spesifik problar bir bölgenin amplifikasyonunu veya delesyonunu tespit etmekte ve çift renkli ayrılma (break-apart) probları, eşleşmiş sinyallerin ayrılmasıyla yeniden düzenlenmeleri ortaya koymaktadır. Çok hedefli paneller, morfolojik olarak belirsiz görünen hücrelerde maligniteye özgü anöploidi paternlerinin tanınabilmesi için çeşitli probları bir araya getirmektedir.
Klinik önem
FISH, sitolojiye objektif sitogenetik bilgi katmakta, örneğin atipik ürotelyal örneklerin değerlendirilmesine veya pulmoner sitolojinin incelenmesine yardımcı olmaktadır ve morfolojik incelemenin yerine değil, bir yardımcı olarak kullanılmaktadır. Bu madde, yöntemin bilgiyi nasıl ürettiğini açıklamaktadır; spesifik test seçimi ve yorumu laboratuvar ve klinik kararlardır ve kişiselleştirilmiş tavsiye niteliğinde değildir.
Kanıt ve kılavuzlar
Boşaltılmış idrarda çok hedefli UroVysion testinin eşleştirilmiş örnek çalışmaları, ürotelyal karsinomun tespiti için performansını geleneksel sitoloji ile karşılaştırmış, tamamlayıcı güçlü yönler ve sınırlamalar bildirmiştir (Lavery et al., 2017; Dimashkieh et al., 2013). Çok hedefli FISH, benzer şekilde akciğer kanserinin tespiti için bronşiyal sitoloji örnekleri üzerinde de değerlendirilmiştir (Zhai et al., 2015).
Tarihçe
İn situ hibridizasyon ilk olarak doku ve kromozom preparatları için geliştirilmiştir; radyoaktif etiketlerin yerine floresan etiketlerin kullanılması, çok renkli, çok problu testleri pratik hale getirmiş ve tekniğin doğrudan sitolojik lamlara uygulanmasına olanak tanımıştır. Çok hedefli idrar panelleri, en yaygın çalışılan sitolojik uygulamalardan biri haline gelmiştir.
Tartışmalar
- Atipik idrar örneklerinde FISH ve geleneksel sitoloji nasıl birleştirilmelidir?
- Çalışmalar, FISH ve sitolojinin tamamlayıcı duyarlılık ve özgüllüğe sahip olduğunu göstermekte, bu da FISH'in refleks testi, morfolojiye yardımcı veya bir triyaj aracı olarak en iyi şekilde kullanılıp kullanılmayacağı sorusunu gündeme getirmektedir; evrensel olarak benimsenmiş tek bir yaklaşım bulunmamaktadır.
İlgili konular
Temel eserler
- dimashkieh-2013
- lavery-2017
Sıkça sorulan sorular
- FISH sitolojik örneklerde ne tür anormallikleri tespit edebilmektedir?
- FISH, lam üzerindeki tek tek hücre çekirdeklerindeki floresan prob sinyallerini sayarak kromozomal anöploidiyi, gen amplifikasyonlarını ve delesyonlarını ve yapısal yeniden düzenlenmeleri ortaya koyabilmektedir.
- FISH geleneksel sitolojinin yerini almakta mıdır?
- Hayır; yardımcı olarak kullanılmaktadır. FISH ve morfolojik sitoloji tamamlayıcı güçlü yönlere sahiptir ve FISH, hücrelerin görsel değerlendirmesinin yerine geçmekten ziyade sitogenetik bilgi eklemektedir.