Sitopatolojide Yardımcı Teknikler ve Moleküler Yöntemler
Yardımcı teknikler, rutin Papanicolaou ve Romanowsky boyalı yaymalar incelendikten sonra, morfolojik bir izlenimi iyileştirmek, bir tümörü sınıflandırmak veya klinik olarak eyleme geçirilebilir bir değişikliği saptamak amacıyla sitolojik materyale uygulanan laboratuvar yöntemleridir. Bu teknikler, sitolojinin erişimini yalnızca morfolojinin ötesine taşımakta; ince iğne aspiratları, efüzyonlar ve eksfolyatif preparatlar gibi küçük örneklerin immünofenotipik, sitogenetik ve moleküler bilgi sağlamasına olanak tanımaktadır.
Tanım
Sitopatolojide yardımcı teknikler, morfolojik tanıyı desteklemek amacıyla sitolojik preparatlar veya artık hücre materyali üzerinde gerçekleştirilen, immünofenotipik, sitogenetik, moleküler ve hesaplamalı yöntemleri içeren yardımcı laboratuvar çalışmalarıdır.
Kapsam
Bu alan, okuyucuyu sitolojik örneklerde kullanılan başlıca yardımcı yöntemler hakkında bilgilendirmektedir: protein belirteçleri için immünositokimya, kromozomal ve gen düzeyindeki değişiklikler için floresan in situ hibridizasyon, hücre süspansiyonlarının immünofenotiplenmesi için akış sitometrisi, sitoloji materyalinde moleküler ve insan papillomavirüsü testleri ve otomatik görüntü analizi ile dijital patoloji. Bu, yapısal bir genel bakış niteliğindedir; her teknik kendi konu düğümünde ayrıntılı olarak ele alınmaktadır.
Alt konular
Temel sorular
- Belirli bir sitolojik örnek ve tanısal soru için hangi yardımcı yöntem uygundur?
- Örnek hazırlığı ve fiksasyon, immünositokimyasal, FISH ve moleküler sonuçların geçerliliğini nasıl etkilemektedir?
- Sınırlı sitolojik materyal, morfolojik ve yardımcı çalışmaların her ikisinin de korunabilmesi için nasıl triyaj edilebilir?
Anahtar kavramlar
- Örnek yeterliliği ve triyajı
- Hücre bloğu hazırlığı
- İmmünofenotipleme
- Doğrulama ve pre-analitik faktörler
- Refleks ve yardımcı testler
- Örnekten tasarruf sağlayan iş akışları
Mekanizmalar
Sitolojik örnekler direkt yaymalar, sıvı bazlı preparatlar, sitospinler veya hücre blokları olarak işlenebilmektedir; seçilen preparat, hangi yardımcı yöntemlerin uygulanabilir olduğunu belirlemektedir. İmmünositokimya, protein antijenlerini işaretli antikorlarla lokalize etmekte; floresan in situ hibridizasyon, spesifik DNA dizilerini floresan problarla görselleştirmekte; akış sitometrisi, süspansiyondaki hücreler üzerindeki antijen ekspresyonunu ölçmekte; ve moleküler testler nükleik asitleri ekstrakte edip sorgulamaktadır. Sitolojik materyal genellikle az olduğundan, morfoloji ve bir veya daha fazla yardımcı çalışmanın her birinin yapılabilmesi için örneğin triyajı tekrarlayan bir tema olmaktadır.
Klinik önem
Yardımcı teknikler, sitolojik bir örneğin yanıtlayabileceği soruların kapsamını genişletmekte; tümör sınıflandırmasını, soy atamasını ve morfoloji ile birlikte raporlanan biyobelirteçlerin saptanmasını desteklemektedir. Bir referans materyali olarak bu alan, bu tür bilgilerin nasıl üretildiğini açıklamaktadır; spesifik test seçimi ve yorumu klinik laboratuvar kararları olup, burada kişiselleştirilmiş tavsiye niteliği taşımamaktadır.
Kanıt ve kılavuzlar
Profesyonel kuruluşlar, bu yöntemlerle ilgili doğrulama ve raporlama çerçeveleri yayımlamışlardır; buna, Amerikan Patologlar Koleji'nin tanısal kullanım için tüm slayt görüntülemenin doğrulanmasına ilişkin kılavuzu (Pantanowitz et al., 2013) da dahildir. İnce iğne aspirat materyali üzerinde doğrudan gerçekleştirilen yeni nesil dizileme (Qiu et al., 2015) gibi yönteme özgü kanıtlar, ilgili konu düğümlerinde özetlenmektedir.
Tarihçe
Sitopatoloji, Papanicolaou boyası üzerine kurulu, tamamen morfolojik bir disiplin olarak başlamıştır. Sonraki on yıllar boyunca immünositokimya, ardından in situ hibridizasyon ve akış sitometrisi, ve en son olarak nükleik asit bazlı moleküler testler ve dijital görüntü analizi, histopatoloji ve laboratuvar tıbbından, sitolojide karşılaşılan daha küçük, farklı şekilde hazırlanmış örneklere uyarlanmıştır.
İlgili konular
Temel eserler
- fetsch-abati-2001
- pantanowitz-2013
Sıkça sorulan sorular
- Yardımcı teknikler sitolojide neden özellikle önemlidir?
- Sitolojik örnekler sıklıkla küçük olup mimariden yoksundur; bu nedenle immünofenotipik veya moleküler bilgi ekleyen yardımcı yöntemler, yalnızca morfolojinin sağlayamayacağı kesin bir sınıflandırmaya sıklıkla olanak tanımaktadır.
- Hücre bloğu nedir ve yardımcı testler için neden önemlidir?
- Hücre bloğu, artık sitolojik materyalden yapılan parafin bloklara gömülü bir preparattır; immünositokimya, in situ hibridizasyon ve moleküler ekstraksiyon için uygun kesitler sağlamakta, bu da onu sitoloji örnekleri üzerinde yardımcı çalışmaların önemli bir kolaylaştırıcısı haline getirmektedir.