高速液体クロマトグラフィー

高速液体クロマトグラフィー（HPLC）は、高圧下の充填カラムを用いて植物抽出物の成分を分離し、検出器によって特徴的なフィンガープリントプロファイルとマーカー化合物の正確な定量化を可能にする。これは生薬の定量的標準化における主要な機器分析法であり、現代の生薬学的品質管理の中心的なツールである。

Definition

高速液体クロマトグラフィーは、液体移動相が高圧下で充填された固定相を通過する際に試料成分を運び、それらを分離して検出することで、保持時間とパターンによって識別し、参照標準に対して定量することを可能にするカラム分離技術である。

Scope

本項目では、カラム液体クロマトグラフィーの原理、生薬および抽出物中のマーカー成分のフィンガープリンティングおよび定量的分析のためのHPLCの使用、ならびにクロマトグラフィー品質管理法におけるその位置について述べる。これは方法論的な参考文献であり、臨床的ガイダンスではない。

Core questions

• 試料のHPLCプロファイルは、表示された材料の参照フィンガープリントと一致するか？
• マーカー成分または活性成分の定量された含有量は、規格に対してどの程度か？
• クロマトグラムは、異物混入、代替、または許容範囲外の成分を示しているか？

Key concepts

• 高圧下のカラム液体クロマトグラフィー
• 固定相と移動相；逆相分離
• 保持時間と分離度
• 検出器（UV/DAD、MS、ELSD）
• 参照標準に対する定量的分析
• HPLCフィンガープリンティングとマーカー化合物
• フィンガープリントのケモメトリックス分析

Mechanisms

ポンプが液体移動相を駆動し、溶解した試料を微細な固定相粒子が充填されたカラムに通す。成分は両相間の分配の違いに応じて分離され、特徴的な保持時間で溶出する。紫外線またはダイオードアレイ、質量分析、または蒸発光散乱検出器などの検出器が溶出ピークを記録し、フィンガープリントプロファイルと、参照標準に対する校正によってマーカー成分の定量的含有量を提供する。定性的なフィンガープリントと定量的な分析を組み合わせることで（しばしばケモメトリックス技術を用いて解釈される）、生薬の同一性、一貫性、および含有量管理のための強力な基盤が得られる（xie-2006, liang-2010, who-2011-qc）。

Clinical relevance

HPLCは、生薬の同一性の検証とマーカー成分または活性成分の正確な測定をサポートし、これはバッチの一貫性と品質を文書化する上で中心的である。本項目は分析方法を記述するものであり、個々の治療決定の根拠となるものではない。

Evidence & guidelines

WHOの品質管理ガイダンスおよび薬局方モノグラフは、生薬の同一性および定量的分析にHPLCを採用しており、クロマトグラフィーフィンガープリンティングに関するレビューでは、HPLCが（しばしばケモメトリックスと組み合わせて）生薬の品質評価における主要なアプローチとして確立されている（who-2011-qc, xie-2006, liang-2010, evans-2009）。

History

高速液体クロマトグラフィーは20世紀後半に古典的なカラムクロマトグラフィーから発展し、医薬品分析における主要な定量的分離法となった。フィンガープリンティングとマーカー定量への応用により、生薬標準化の礎となり、質量分析法やケモメトリックスデータ分析との組み合わせがますます進んでいる（xie-2006, liang-2010, evans-2009）。

Seminal works

• xie-2006
• liang-2010

Frequently asked questions

なぜHPLCは定量的標準化に好まれるのか？

カラム上で成分を分離し、高感度検出器を備え、参照標準に対して校正できるため、より単純な定性的方法では不可能なマーカー化合物や活性化合物の含有量を正確に測定できるためである。

HPLCフィンガープリントとは何か？

これは、抽出物によって生成される、特定の保持時間におけるピークの特性パターンである。このプロファイルを参照と比較することで、同一性と一貫性の確認に役立ち、ケモメトリックス技術を用いて分析することができる。