Mikroskopi dan Metode Pewarnaan untuk Jamur

Mikroskopi langsung dan pewarnaan memungkinkan laboratorium melihat elemen jamur dalam spesimen tanpa menunggu kultur. Preparat basah sederhana, pencerah fluoresen, dan pewarnaan jaringan mengungkapkan hifa, ragi, dan spora, memberikan bukti cepat keberadaan jamur dan, dalam jaringan, invasi.

Definition

Metode mikroskopi dan pewarnaan untuk jamur adalah teknik yang membuat struktur jamur terlihat dalam spesimen klinis atau sediaan jaringan, menggunakan agen pembersih, pengikat dinding sel fluoresen, atau pewarna histokimia untuk menampilkan hifa, ragi, dan spora di bawah mikroskop cahaya atau fluoresensi.

Scope

Topik ini mencakup metode untuk memvisualisasikan jamur: preparat basah kalium hidroksida yang membersihkan spesimen, pewarna fluoresen seperti calcofluor white yang mengikat dinding sel jamur, dan pewarna histopatologi yang digunakan pada sediaan jaringan. Ini juga mencakup apa yang dapat dan tidak dapat diberitahukan oleh morfologi kepada pengamat tentang identitas. Ini adalah referensi metode deskriptif, bukan protokol diagnostik atau pengobatan.

Core questions

• Apakah elemen jamur ada dalam spesimen ini, dan bentuk morfologi apa yang mereka ambil?
• Pewarnaan mana yang paling baik menunjukkan jamur dalam preparat basah versus sediaan jaringan?
• Seberapa jauh morfologi saja dapat mempersempit identitas jamur?
• Apakah mikroskopi menunjukkan invasi jaringan dibandingkan dengan kolonisasi permukaan?

Key concepts

• Preparat basah kalium hidroksida (KOH)
• Pewarnaan fluoresen calcofluor white
• Pewarnaan periodic acid-Schiff (PAS)
• Pewarnaan Grocott-Gomori methenamine silver (GMS)
• Hifa, ragi, dan pseudohifa
• Invasi jaringan versus kolonisasi
• Batasan identifikasi morfologi

Mechanisms

Dalam preparat KOH, kalium hidroksida melarutkan keratin dan materi inang lainnya, meninggalkan dinding jamur yang refraktif terlihat di bawah mikroskop. Pencerah fluoresen seperti calcofluor white mengikat kitin dan selulosa dalam dinding sel jamur dan berfluoresensi di bawah sinar ultraviolet, dengan jelas menguraikan hifa dan ragi dengan latar belakang gelap. Dalam jaringan, pewarnaan khusus memanfaatkan dinding yang kaya polisakarida: periodic acid-Schiff menyoroti dinding jamur dalam warna magenta, dan Grocott-Gomori methenamine silver mengendapkan perak untuk membuatnya hitam, memungkinkan jamur terlihat di dalam sediaan dan, yang terpenting, dinilai sebagai menginvasi jaringan. Morfologi, pola percabangan hifa, keberadaan ragi atau pseudohifa, dan septasi, mempersempit diagnosis banding tetapi jarang spesifik spesies, sehingga mikroskopi dipasangkan dengan kultur, antigen, atau metode molekuler untuk identifikasi definitif.

Clinical relevance

Mikroskopi memberikan beberapa bukti tercepat bahwa jamur hadir dan, dalam jaringan, bahwa ia menginvasi, yang merupakan pusat bagaimana penyakit jamur invasif dikenali. Entri ini menjelaskan metode dan batas interpretasinya sebagai materi referensi; ini tidak menginstruksikan tentang persiapan spesimen atau pengelolaan pasien.

Evidence & guidelines

Tinjauan histopatologi jamur mendokumentasikan pewarnaan yang digunakan untuk menampilkan jamur dalam jaringan dan petunjuk morfologi, serta batasan, identifikasi organisme berdasarkan penampilan. Rekomendasi praktik terbaik untuk mendiagnosis penyakit jamur serius menempatkan mikroskopi langsung dan pewarnaan fluoresen sebagai metode lini depan cepat yang digunakan bersama dengan kultur dan tes molekuler.

History

Mikroskopi langsung adalah salah satu metode mikologi tertua, dengan preparat basah KOH telah lama digunakan untuk menunjukkan dermatofita dan jamur lainnya. Pewarnaan histokimia seperti metode Grocott-Gomori methenamine silver dan periodic acid-Schiff menjadi standar pada abad kedua puluh untuk menunjukkan jamur dalam jaringan, dan pencerah fluoresen kemudian menambahkan sensitivitas dengan membuat dinding sel bersinar di bawah sinar ultraviolet.

Seminal works

• guarner-2011
• dehoog-2020

Frequently asked questions

Dapatkah mikroskopi mengidentifikasi spesies jamur yang tepat?

Umumnya tidak. Mikroskopi dapat menunjukkan bahwa jamur hadir dan menyarankan kategori luas seperti ragi atau kapang, tetapi identifikasi spesies yang tepat umumnya memerlukan kultur, spektrometri massa, atau pengurutan DNA.

Mengapa calcofluor white berguna untuk melihat jamur?

Calcofluor white mengikat komponen dinding sel jamur dan berfluoresensi di bawah sinar ultraviolet, membuat hifa dan ragi yang jarang sekalipun menonjol dengan cerah, yang meningkatkan deteksi dibandingkan dengan preparat basah yang tidak diwarnai.