Hibridisasi In Situ Fluoresensi (FISH) dalam Sitologi

Hibridisasi in situ fluoresensi (FISH) menggunakan probe DNA berlabel fluoresen yang berikatan dengan sekuens komplementer dalam nukleus sel, membuat daerah kromosom atau gen spesifik terlihat di bawah mikroskop fluoresensi. Diterapkan pada spesimen sitologi, teknik ini dapat mendeteksi aneuploidi, amplifikasi gen, delesi, dan penataan ulang secara langsung pada sel utuh, menambahkan dimensi sitogenetik pada penilaian morfologi.

Definition

FISH adalah teknik sitogenetik tambahan di mana probe asam nukleus berlabel fluoresen berhibridisasi dengan target DNA spesifik di dalam sel pada sediaan sitologi, memungkinkan visualisasi perubahan jumlah salinan kromosom dan penataan ulang struktural.

Scope

Entri ini mencakup prinsip hibridisasi probe pada sediaan sitologi, jenis-jenis abnormalitas genomik yang dapat diidentifikasi oleh FISH, dan aplikasi sitologi yang telah mapan seperti pengujian multitarget pada spesimen urin dan bronkial. Ini adalah referensi metodologis dan tidak menyediakan protokol pengujian atau interpretasi.

Core questions

• Abnormalitas tingkat kromosom atau gen apa yang dapat diidentifikasi oleh FISH dalam spesimen sitologi tertentu?
• Bagaimana desain probe dan kriteria penghitungan sinyal menentukan hasil positif?
• Bagaimana FISH melengkapi morfologi sitologi pada sampel yang meragukan atau atipikal?

Key concepts

• Hibridisasi probe spesifik sekuens
• Probe sentromerik, lokus-spesifik, dan pemisah
• Deteksi aneuploidi dan jumlah salinan
• Panel probe multitarget (misalnya, UroVysion)
• Penghitungan sinyal dan ambang batas penilaian
• Aplikasi pada sel utuh pada slide

Mechanisms

Probe DNA untai tunggal yang terdenaturasi, yang dibawa oleh fluorofor, menempel pada sekuens target komplementernya di dalam DNA nuklir yang terdenaturasi dari sel yang difiksasi pada slide; setelah probe yang tidak terikat dicuci, sinyal yang terikat dihitung di bawah mikroskop fluoresensi. Probe sentromerik melaporkan jumlah salinan kromosom, probe lokus-spesifik mendeteksi amplifikasi atau delesi suatu daerah, dan probe pemisah dua warna (dual-colour break-apart probes) mengungkapkan penataan ulang dengan pemisahan sinyal berpasangan. Panel multitarget menggabungkan beberapa probe sehingga pola aneuploidi yang khas keganasan dapat dikenali pada sel yang secara morfologi terlihat ambigu.

Clinical relevance

FISH menambahkan informasi sitogenetik objektif pada sitologi, misalnya membantu mengevaluasi sampel urothelial atipikal atau menilai sitologi paru, dan digunakan sebagai pelengkap daripada pengganti tinjauan morfologi. Entri ini menjelaskan bagaimana metode tersebut menghasilkan informasi; pemilihan dan interpretasi pengujian spesifik adalah keputusan laboratorium dan klinis dan bukan merupakan saran individual.

Evidence & guidelines

Studi berpasangan dari pengujian UroVysion multitarget pada urin yang dikeluarkan telah membandingkan kinerjanya dengan sitologi konvensional untuk mendeteksi karsinoma urothelial, melaporkan kekuatan dan keterbatasan yang saling melengkapi (Lavery et al., 2017; Dimashkieh et al., 2013). FISH multitarget juga telah dievaluasi pada spesimen sitologi bronkial untuk deteksi kanker paru-paru (Zhai et al., 2015).

History

Hibridisasi in situ pertama kali dikembangkan untuk sediaan jaringan dan kromosom; penggantian label fluoresen untuk label radioaktif membuat pengujian multiwarna dan multi-probe menjadi praktis dan memungkinkan teknik tersebut diterapkan langsung pada slide sitologi. Panel urin multitarget menjadi salah satu aplikasi sitologi yang paling banyak dipelajari.

Debates

Bagaimana FISH dan sitologi konvensional harus digabungkan dalam sampel urin atipikal?

Studi menunjukkan FISH dan sitologi memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang saling melengkapi, menimbulkan pertanyaan apakah FISH paling baik digunakan sebagai tes refleks, pelengkap morfologi, atau alat triase, tanpa ada satu pendekatan pun yang diadopsi secara universal.

Seminal works

• dimashkieh-2013
• lavery-2017

Frequently asked questions

Jenis abnormalitas apa yang dapat dideteksi FISH dalam sampel sitologi?

FISH dapat mengungkapkan aneuploidi kromosom, amplifikasi dan delesi gen, serta penataan ulang struktural dengan menghitung sinyal probe fluoresen dalam nukleus sel individual pada slide.

Apakah FISH menggantikan sitologi konvensional?

Tidak; ini digunakan sebagai pelengkap. FISH dan sitologi morfologi memiliki kekuatan yang saling melengkapi, dan FISH menambahkan informasi sitogenetik daripada menggantikan penilaian visual sel.