आणविक निदान तकनीकें

आणविक निदान तकनीकें जीवाणुओं का पता उनके विकास के बजाय उनके न्यूक्लिक एसिड द्वारा लगाती हैं और उनका लक्षण वर्णन करती हैं, जिसमें पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन और अनुक्रमण जैसी विधियों का उपयोग किया जाता है। वे नमूनों से सीधे जीवों की पहचान कर सकती हैं, अक्सर कल्चर की तुलना में तेज़ी से और कभी-कभी जब कल्चर विफल हो जाता है, और वे प्रतिरोध निर्धारकों का पता लगा सकती हैं।

Definition

आणविक निदान तकनीकें प्रयोगशाला विधियाँ हैं जो जीवों या प्रतिरोध निर्धारकों की पहचान करने के लिए सूक्ष्मजीवों के न्यूक्लिक एसिड का पता लगाती हैं, उन्हें प्रवर्धित करती हैं, या उनका अनुक्रमण करती हैं, आमतौर पर जीव को कल्चर करने की आवश्यकता के बिना।

Scope

यह विषय न्यूक्लिक-एसिड प्रवर्धन परीक्षणों, वास्तविक समय और मल्टीप्लेक्स पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन, अनुक्रमण-आधारित पहचान, और सिंड्रोमिक आणविक पैनलों को शामिल करता है, साथ ही उनकी शक्तियों और व्याख्यात्मक सावधानियों को भी। इसे एक कार्यप्रणाली विषय के रूप में प्रस्तुत किया गया है और यह व्यक्तिगत रोगियों के लिए परीक्षण या उपचार निर्देश प्रदान नहीं करता है।

Core questions

• न्यूक्लिक-एसिड प्रवर्धन परीक्षण जीवाणुओं का पता कैसे लगाते हैं?
• आणविक विधियाँ कब सफल हो सकती हैं जहाँ कल्चर विफल हो जाता है, और उनकी सीमाएँ क्या हैं?
• आणविक और कल्चर-आधारित निदान एक दूसरे के पूरक कैसे हैं?

Key concepts

• न्यूक्लिक-एसिड प्रवर्धन परीक्षण
• वास्तविक समय (मात्रात्मक) पीसीआर
• मल्टीप्लेक्स और सिंड्रोमिक पैनल
• 16S rRNA जीन अनुक्रमण
• प्रतिरोध जीनों का पता लगाना
• गैर-व्यवहार्य जीवों का पता लगाना
• विश्लेषणात्मक संवेदनशीलता और विशिष्टता

Mechanisms

आणविक विधियाँ एक विशिष्ट न्यूक्लिक-एसिड अनुक्रम को लक्षित करती हैं और उसे प्रवर्धित करती हैं ताकि जीव की थोड़ी मात्रा का भी पता लगाया जा सके; वास्तविक समय के प्रारूप लक्ष्य को निर्धारित करते हैं और टर्नअराउंड समय को कम करते हैं, जबकि मल्टीप्लेक्स पैनल एक साथ कई रोगजनकों के लिए परीक्षण करते हैं (एस्पी 2006)। 16S rRNA जैसे संरक्षित जीनों का अनुक्रमण उन जीवों की पहचान कर सकता है जिन्हें कल्चर करना या फेनोटाइप करना मुश्किल होता है। क्योंकि ये विधियाँ विकास के बजाय न्यूक्लिक एसिड का पता लगाती हैं, वे तब भी परिणाम दे सकती हैं जब कल्चर नकारात्मक हो, जिसमें एंटीबायोटिक के संपर्क के बाद भी शामिल है, लेकिन वे गैर-व्यवहार्य जीवों या उपनिवेशकों का भी पता लगा सकती हैं, इसलिए परिणामों की व्याख्या संदर्भ में आवश्यक है। समीक्षाएँ बताती हैं कि आणविक निदान ने गति और संवेदनशीलता में कैसे सुधार किया है, जबकि नए व्याख्यात्मक प्रश्न भी उठाए हैं (एस्पी 2006; कैलिएंडो 2013)।

Clinical relevance

आणविक निदान इस बात को प्रभावित करता है कि संक्रमणों को कितनी तेज़ी से और मज़बूती से जीवों के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता है और प्रतिरोध का पता कैसे लगाया जाता है, लेकिन उनकी व्याख्या कल्चर से भिन्न होती है क्योंकि एक जीन का पता लगाना एक व्यवहार्य, संवेदनशीलता-परीक्षण योग्य जीव को पुनः प्राप्त करने के समान नहीं है। यह विषय बताता है कि प्रयोगशाला साक्ष्य कैसे उत्पन्न होते हैं और व्यक्तिगत निदान या उपचार निर्णयों का आधार नहीं है।

Evidence & guidelines

व्यापक समीक्षाएँ नियमित नैदानिक ​​सूक्ष्म जीव विज्ञान में वास्तविक समय पीसीआर और अन्य आणविक विधियों के अनुप्रयोगों और प्रदर्शन (एस्पी 2006) और बेहतर संक्रामक-रोग निदान की दिशा में व्यापक बदलाव (कैलिएंडो 2013) का वर्णन करती हैं; मानक ग्रंथ आणविक विधियों और कल्चर के साथ उनके स्थान का विवरण देते हैं (जॉर्गेंसन 2015)।

History

1980 के दशक में पेश की गई पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन ने लक्षित न्यूक्लिक-एसिड का पता लगाना व्यावहारिक बना दिया, और वास्तविक समय और मल्टीप्लेक्स प्रारूप बाद में नियमित नैदानिक ​​प्रयोगशालाओं में प्रवेश कर गए, जिससे आणविक निदान और अनुक्रम-आधारित पहचान का विस्तार हुआ (एस्पी 2006; कैलिएंडो 2013)।

Seminal works

• espy-2006
• caliendo-2013

Frequently asked questions

क्या आणविक परीक्षण कल्चर की जगह ले सकते हैं?

पूरी तरह से नहीं; वे अक्सर जीवों का तेज़ी से पता लगाते हैं और कभी-कभी जब कल्चर विफल हो जाता है, लेकिन कल्चर अभी भी आगे के लक्षण वर्णन के लिए एक व्यवहार्य आइसोलेट प्रदान करता है, और न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने वाले आणविक परिणामों के लिए सावधानीपूर्वक व्याख्या की आवश्यकता होती है।

कल्चर नकारात्मक होने पर आणविक परीक्षण सकारात्मक क्यों हो सकता है?

आणविक विधियाँ विकास के बजाय न्यूक्लिक एसिड का पता लगाती हैं, इसलिए वे तब भी सकारात्मक रह सकती हैं जब जीव गैर-व्यवहार्य हों या कम संख्या में मौजूद हों, जिसमें एंटीबायोटिक के संपर्क के बाद भी शामिल है जो कल्चर रिकवरी को रोकता है।