Méthodes de microscopie et de coloration pour les champignons

La microscopie directe et les méthodes de coloration permettent au laboratoire de visualiser les éléments fongiques dans un échantillon sans attendre les résultats de la culture. Les préparations humides simples, les agents de fluorescence et les colorations tissulaires révèlent les hyphes, les levures et les spores, fournissant une preuve rapide de la présence fongique et, dans les tissus, de l'invasion.

Definition

Les méthodes de microscopie et de coloration pour les champignons sont les techniques qui rendent les structures fongiques visibles dans les échantillons cliniques ou les coupes de tissus, en utilisant des agents clarifiants, des liants fluorescents de la paroi cellulaire ou des colorations histochimiques pour visualiser les hyphes, les levures et les spores sous microscopie optique ou à fluorescence.

Scope

Ce sujet aborde les méthodes de visualisation des champignons : les préparations humides à l'hydroxyde de potassium qui clarifient les échantillons, les colorants fluorescents tels que le blanc de Calcofluor qui se lient aux parois cellulaires fongiques, et les colorations histopathologiques utilisées sur les coupes de tissus. Il examine également ce que la morphologie peut ou ne peut pas révéler à l'observateur concernant l'identification. Il s'agit d'une référence descriptive de méthodes, et non d'un protocole de diagnostic ou de traitement.

Core questions

• Des éléments fongiques sont-ils présents dans cet échantillon, et quelle forme morphologique prennent-ils ?
• Quelle coloration met le mieux en évidence les champignons dans une préparation humide par rapport à une coupe de tissu ?
• Dans quelle mesure la morphologie seule peut-elle affiner l'identification du champignon ?
• La microscopie révèle-t-elle une invasion tissulaire par opposition à une colonisation de surface ?

Key concepts

• Préparation humide à l'hydroxyde de potassium (KOH)
• Coloration fluorescente au blanc de Calcofluor
• Coloration au périodique acide-Schiff (PAS)
• Coloration au Grocott-Gomori methenamine silver (GMS)
• Hyphes, levures et pseudohyphes
• Invasion tissulaire versus colonisation
• Limites de l'identification morphologique

Mechanisms

Dans une préparation au KOH, l'hydroxyde de potassium dissout la kératine et d'autres matériaux de l'hôte, laissant les parois fongiques réfringentes visibles au microscope. Les agents de fluorescence tels que le blanc de Calcofluor se lient à la chitine et à la cellulose de la paroi cellulaire fongique et fluorescent sous lumière ultraviolette, délimitant nettement les hyphes et les levures sur un fond sombre. Dans les tissus, des colorations spéciales exploitent la paroi riche en polysaccharides : le périodique acide-Schiff (PAS) met en évidence les parois fongiques en magenta, et le Grocott-Gomori methenamine silver (GMS) dépose de l'argent pour les rendre noires, permettant de visualiser les champignons dans les coupes et, de manière cruciale, de juger s'ils envahissent les tissus. La morphologie, le mode de ramification des hyphes, la présence de levures ou de pseudohyphes, et la septation, réduit le diagnostic différentiel mais est rarement spécifique à l'espèce. Par conséquent, la microscopie est associée à la culture, aux méthodes antigéniques ou moléculaires pour une identification définitive.

Clinical relevance

La microscopie fournit l'une des preuves les plus rapides de la présence d'un champignon et, dans les tissus, de son invasion, ce qui est essentiel pour la reconnaissance des maladies fongiques invasives. Cette entrée explique les méthodes et leurs limites interprétatives en tant que matériel de référence ; elle ne donne pas d'instructions sur la préparation des échantillons ou la prise en charge des patients.

Evidence & guidelines

Les revues d'histopathologie fongique documentent les colorations utilisées pour visualiser les champignons dans les tissus ainsi que les indices morphologiques, et les limites, de l'identification des organismes par leur apparence. Les recommandations de bonnes pratiques pour le diagnostic des maladies fongiques graves positionnent la microscopie directe et la coloration fluorescente comme des méthodes de première ligne rapides, utilisées conjointement avec la culture et les tests moléculaires.

History

La microscopie directe compte parmi les plus anciennes méthodes mycologiques, les préparations humides au KOH étant utilisées depuis longtemps pour mettre en évidence les dermatophytes et d'autres champignons. Les colorations histochimiques telles que les méthodes Grocott-Gomori methenamine silver (GMS) et périodique acide-Schiff (PAS) sont devenues la norme au XXe siècle pour visualiser les champignons dans les tissus, et les agents de fluorescence ont ensuite ajouté de la sensibilité en faisant briller les parois cellulaires sous lumière ultraviolette.

Seminal works

• guarner-2011
• dehoog-2020

Frequently asked questions

La microscopie peut-elle identifier l'espèce fongique exacte ?

Généralement non. La microscopie peut montrer la présence de champignons et suggérer de grandes catégories comme les levures ou les moisissures, mais l'identification précise de l'espèce nécessite généralement une culture, une spectrométrie de masse ou un séquençage de l'ADN.

Pourquoi le blanc de Calcofluor est-il utile pour visualiser les champignons ?

Le blanc de Calcofluor se lie aux composants de la paroi cellulaire fongique et fluoresce sous lumière ultraviolette, ce qui fait ressortir brillamment même les hyphes et les levures peu nombreuses, améliorant ainsi la détection par rapport à une préparation humide non colorée.