Immunohistochimie et Immunofluorescence

L'immunohistochimie (IHC) et l'immunofluorescence emploient des anticorps pour localiser des molécules spécifiques au sein d'une coupe de tissu. Un anticorps se lie à son antigène cible in situ et est ensuite rendu visible — soit par une enzyme qui dépose un produit coloré (IHC), soit par un marqueur fluorescent observé sous un microscope à fluorescence (immunofluorescence) — ce qui permet d'identifier des types cellulaires et des molécules que les colorations histologiques conventionnelles ne peuvent pas distinguer.

Definition

L'immunohistochimie et l'immunofluorescence sont des méthodes basées sur l'utilisation d'anticorps qui permettent de localiser des antigènes spécifiques dans des coupes de tissu, en liant des anticorps marqués à leurs cibles et en détectant le marqueur lié par des réactions colorimétriques enzymatiques (immunohistochimie) ou par fluorescence (immunofluorescence).

Scope

Ce sujet couvre le principe du marquage à base d'anticorps, les méthodes de détection directe et indirecte, les systèmes d'amplification du signal, la récupération d'antigène, ainsi que la validation et le contrôle qualité de ces essais. Il constitue une référence méthodologique et n'a pas pour but de fournir une interprétation clinique ou des recommandations thérapeutiques.

Core questions

• Comment un anticorps réalise-t-il une localisation moléculaire spécifique dans les tissus ?
• En quoi les schémas de détection directe et indirecte diffèrent-ils ?
• Comment les systèmes d'amplification et la récupération d'antigène améliorent-ils la sensibilité ?
• Comment les essais basés sur les anticorps sont-ils validés et contrôlés pour une interprétation fiable ?

Key concepts

• Spécificité de la liaison antigène-anticorps
• Détection directe vs indirecte
• Amplification du signal (par ex. avidine-biotine, systèmes polymères)
• Marqueurs chromogènes vs fluorescents
• Récupération d'antigène (épitope)
• Contrôles et validation des essais
• Spécificité et réactivité croisée

Mechanisms

L'événement central est la liaison spécifique d'un anticorps à son antigène au sein de la coupe. Dans la méthode directe, l'anticorps primaire lui-même porte le marqueur ; dans la méthode indirecte, un anticorps primaire non marqué est détecté par un anticorps secondaire marqué, ce qui amplifie et standardise la détection. Coons et ses collaborateurs ont été les premiers à montrer qu'un anticorps marqué par un groupe fluorescent pouvait localiser son antigène dans les tissus (Coons, 1941), établissant ainsi l'immunofluorescence. La détection enzymatique a ensuite permis d'obtenir des signaux chromogènes permanents, et la sensibilité a été augmentée par des systèmes d'amplification tels que le complexe avidine-biotine-peroxydase (Hsu et al., 1981) et, plus tard, la détection basée sur des polymères. Étant donné que la fixation par aldéhydes peut masquer les épitopes par réticulation, des étapes de récupération d'antigène basées sur la chaleur ou les protéases sont souvent utilisées pour restaurer la liaison des anticorps dans les tissus fixés au formol et inclus en paraffine (Shi et al., 1991). Une interprétation fiable dépend de contrôles positifs et négatifs appropriés et d'une validation analytique formelle de chaque essai (Fitzgibbons et al., 2014).

Clinical relevance

Le marquage à base d'anticorps est fondamental pour une grande partie du diagnostic et de la recherche modernes basés sur les tissus, en permettant l'identification des lignées cellulaires et de marqueurs moléculaires spécifiques. Cette entrée décrit les méthodes et leurs exigences de qualité de manière conceptuelle ; elle constitue une orientation de référence et non une base pour des décisions diagnostiques ou thérapeutiques individuelles.

Evidence & guidelines

Des directives professionnelles concernant la validation analytique des essais immunohistochimiques ont été émises par le College of American Pathologists (Fitzgibbons et al., 2014), et les principes méthodologiques sont consolidés dans les références standard d'histotechnologie (Suvarna et al., 2018). Les méthodes de récupération d'antigène et d'amplification découlent d'études primaires fondamentales (Shi et al., 1991 ; Hsu et al., 1981).

History

La localisation basée sur les anticorps a débuté avec la méthode des anticorps fluorescents de Coons et ses collaborateurs en 1941, rendant possible la détection moléculaire spécifique dans les tissus. Les méthodes de marquage enzymatique ont ensuite produit des signaux visibles permanents, les systèmes d'amplification tels que le complexe avidine-biotine-peroxydase (Hsu et al., 1981) ont augmenté la sensibilité, et la récupération d'antigène induite par la chaleur (Shi et al., 1991) a étendu l'immunomarquage fiable aux matériaux fixés en routine et inclus en paraffine. Des directives de standardisation et de validation ont suivi à mesure que ces méthodes sont devenues centrales dans la pratique diagnostique (Fitzgibbons et al., 2014).

Key figures

• Albert Coons
• Su-Ming Hsu
• Shan-Rong Shi

Seminal works

• coons-1941
• hsu-1981
• shi-1991

Frequently asked questions

Quelle est la différence entre l'immunohistochimie et l'immunofluorescence ?

Les deux méthodes utilisent des anticorps pour localiser les antigènes dans les tissus ; l'immunohistochimie visualise l'anticorps lié par une enzyme qui dépose un produit coloré observé en microscopie optique, tandis que l'immunofluorescence utilise un marqueur fluorescent observé sous un microscope à fluorescence.

Pourquoi la récupération d'antigène est-elle souvent nécessaire ?

La fixation au formol réticule les protéines et peut masquer les épitopes que les anticorps reconnaissent ; les étapes de récupération d'antigène basées sur la chaleur ou les enzymes peuvent démasquer ces épitopes afin que la coloration devienne possible dans les tissus fixés au formol et inclus en paraffine.