Fixation et inclusion des tissus

La fixation et l'inclusion sont les premières étapes préparatoires de l'histologie. La fixation stabilise chimiquement les tissus, arrêtant ainsi leur dégradation et préservant leur structure, tandis que l'inclusion entoure le tissu fixé d'un milieu de soutien ferme afin qu'il puisse être coupé en coupes minces. Ensemble, elles déterminent la fidélité avec laquelle la lame finale reflète le tissu vivant.

Definition

La fixation tissulaire est le traitement chimique ou physique qui arrête l'autolyse et la putréfaction et stabilise la structure des tissus ; l'inclusion est l'infiltration subséquente du tissu fixé et traité avec un milieu de soutien (tel que la paraffine ou la résine) afin que des coupes minces puissent être réalisées.

Scope

Ce sujet aborde les objectifs et les principales chimies de la fixation, les étapes du traitement des tissus (déshydratation, éclaircissement, infiltration) et l'inclusion dans la paraffine ou la résine. Il s'agit d'une référence méthodologique et ne fournit pas de protocoles de dosage cliniques ou de laboratoire.

Core questions

• Comment un fixateur arrête-t-il la dégradation des tissus tout en préservant leur structure ?
• En quoi les fixateurs réticulants et coagulants diffèrent-ils dans leurs effets ?
• Pourquoi les tissus doivent-ils être déshydratés, éclaircis et infiltrés avant l'inclusion ?
• Comment le milieu d'inclusion contraint-il l'épaisseur des coupes et l'analyse en aval ?

Key concepts

• Autolyse et son arrêt
• Fixateurs réticulants (aldéhydes)
• Fixateurs coagulants (à base d'alcool)
• Fixation à la formaline
• Déshydratation et éclaircissement
• Inclusion en paraffine
• Inclusion en résine

Mechanisms

Les fixateurs agissent selon l'un des deux grands mécanismes. Les fixateurs réticulants, tels que le formaldéhyde et le glutaraldéhyde, forment des ponts méthylène ou plus longs entre les groupes réactifs (principalement sur les protéines), bloquant ainsi la structure moléculaire ; le glutaraldéhyde, avec ses deux groupes aldéhydes, réticule plus extensivement et préserve particulièrement bien l'ultrastructure fine, ce qui explique son rôle central dans la fixation pour la microscopie électronique (Sabatini, 1963). Les fixateurs coagulants, tels que l'éthanol, agissent plutôt en déshydratant et en précipitant les protéines. Étant donné que la réticulation peut masquer les antigènes, des fixateurs ont été conçus pour équilibrer la préservation structurelle et la réactivité conservée, comme dans la formulation périodate-lysine-paraformaldéhyde développée pour l'immunomicroscopie électronique (McLean & Nakane, 1974). Après fixation, le tissu est déshydraté à travers des alcools de concentration croissante, éclairci dans un solvant miscible avec le milieu d'inclusion, et infiltré avec de la paraffine fondue ou de la résine liquide, qui, en durcissant, fournit le support mécanique nécessaire à la microtomie.

Clinical relevance

La fixation et l'inclusion déterminent la qualité et la préservation moléculaire des blocs tissulaires utilisés en pathologie diagnostique et en recherche. Cette entrée explique les méthodes de manière conceptuelle ; elle décrit comment les préparations sont réalisées et ne constitue pas une base pour des décisions diagnostiques ou thérapeutiques individuelles.

Evidence & guidelines

La pratique de la fixation et du traitement est consolidée dans les références standard d'histotechnologie telles que Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques (Suvarna et al., 2018) et Kiernan (2015). Les variables pré-analytiques de la fixation (type de fixateur, délai avant fixation, durée) sont reconnues comme influençant les dosages moléculaires en aval et sont abordées dans la littérature sur la qualité en laboratoire, dans les sujets connexes d'immunohistochimie et d'évaluation de la qualité.

History

La chimie pratique de la fixation s'est développée au cours du XIXe siècle, avec l'introduction de la formaline comme fixateur tissulaire à la fin des années 1890 et l'établissement de l'inclusion en paraffine comme méthode pour obtenir des coupes minces. Au XXe siècle, la fixation au glutaraldéhyde a été caractérisée pour la préservation ultrastructurale (Sabatini, 1963), et des fixateurs spécialisés ont été formulés pour préserver l'antigénicité en même temps que la structure (McLean & Nakane, 1974).

Key figures

• David Sabatini
• Paul Nakane

Seminal works

• sabatini-1963
• mclean-1974

Frequently asked questions

Pourquoi la formaline est-elle le fixateur le plus couramment utilisé en histologie de routine ?

Le formaldéhyde tamponné pénètre raisonnablement bien les tissus, réticule les protéines pour préserver globalement la structure, est peu coûteux et est compatible avec les colorations de routine et la plupart des dosages en aval, ce qui en a fait le fixateur standard à usage général.

Pourquoi les tissus doivent-ils être déshydratés et éclaircis avant l'inclusion en paraffine ?

La paraffine n'est pas miscible avec l'eau ; l'eau du tissu est donc remplacée par des alcools de concentration croissante (déshydratation), puis par un solvant miscible avec la paraffine (éclaircissement) avant que la paraffine fondue ne puisse infiltrer et soutenir le tissu.