显微镜和免疫荧光技术

显微镜和免疫荧光技术通过可视化病毒颗粒本身或感染细胞内的病毒抗原来检测病毒。电子显微镜直接解析病毒颗粒的形态，而免疫荧光则使用荧光标记的抗体在荧光显微镜下照亮特定的病毒蛋白，将抗体结合的特异性与显微镜的空间细节相结合。

Definition

显微镜和免疫荧光技术是基于可视化的检测方法，它们要么直接成像病毒颗粒（电子显微镜），要么使用荧光标记的抗体揭示细胞中的病毒抗原（免疫荧光）。

Scope

本主题涵盖用于检测细胞和组织中病毒抗原的荧光抗体方法（直接和间接免疫荧光），以及用于可视化病毒颗粒的电子显微镜方法，例如负染色。它以参考水平解释了原理和用途，不提供方案或临床管理建议。

Core questions

• 与检测病毒基因组相比，何时可视化病毒颗粒或抗原能提供更多信息？
• 直接和间接免疫荧光在标记物传递方式上有何不同？
• 当病毒身份不明时，电子显微镜形态学能揭示什么？
• 抗体结合的特异性和标本质量如何影响解释？

Key concepts

• 直接荧光抗体 (DFA) 检测
• 间接免疫荧光分析 (IFA)
• 荧光团标记抗体
• 电子显微镜
• 负染色
• 免疫电镜
• 病毒包涵体
• 基于形态的识别

Mechanisms

免疫荧光利用荧光染料标记的抗体。在直接法中，标记的抗体与固定细胞中的病毒抗原结合，并在显微镜下显示为荧光；在间接法中，未标记的初级抗体结合抗原，然后标记的次级抗体结合初级抗体，从而放大信号。荧光的模式和位置指示存在哪些病毒抗原以及它们的位置。电子显微镜则直接成像结构：负染色用电子致密染料包围病毒颗粒，使其形状和大小突出，从而可以形态学识别病毒家族。免疫电镜为这种可视化增加了基于抗体的特异性。由于这些方法读取空间细节，因此标本制备质量和抗体的特异性强烈影响可以得出的结论。

Clinical relevance

免疫荧光在细胞和组织中提供快速的基于抗原的检测和定位，电子显微镜则提供了一种通过形状识别病毒颗粒的通用方法，这对于识别新型或意想不到的病原体具有历史重要性。本条目描述了这些可视化方法所显示的内容及其对标本质量的依赖性；它描述了方法学，而不是个体诊断或治疗决策的基础。

History

免疫荧光由Albert Coons及其同事建立，他们于1950年改进了荧光抗体定位抗原的方法，使其变得实用，并催生了广泛的诊断检测家族。由Brenner和Horne于1959年引入的负染色电子显微镜为病毒学家提供了一种快速可视化病毒颗粒形态的方法，并在分子鉴定普及之前，为许多病毒的发现和识别做出了贡献。

Key figures

• Albert Coons
• Sydney Brenner
• Robert Horne

Seminal works

• coons-kaplan-1950
• brenner-horne-1959

Frequently asked questions

直接和间接免疫荧光有什么区别？

在直接免疫荧光中，单个荧光标记抗体结合病毒抗原，而间接免疫荧光则使用未标记的初级抗体，然后是标记的次级抗体，这会放大信号并增加灵活性，但代价是增加了一个步骤。

尽管分子方法不断发展，为什么电子显微镜仍然有用？

电子显微镜可以通过其特征形状识别病毒颗粒，而无需事先知道要寻找哪种病毒，这使其对于研究靶向分子检测可能遗漏的新型或意想不到的病原体具有重要价值。