Dairesel Dikroizm
Circular Dichroism Spectroscopy · Ayrıca şöyle bilinir: CD spectroscopy, circular dichroism, CD analysis
Dairesel Dikroizm (DD) spektroskopisi, özellikle proteinler ve nükleik asitler tarafından optik olarak aktif moleküllerin sol ve sağ dairesel polarize ışığı diferansiyel absorbansını ölçer. 1969'da Greenfield ve Fasman tarafından tanıtılan DD, ikincil yapıyı (alfa-heliks, beta-tabaka) karakterize etmek, protein katlanma geçişlerini izlemek ve pH, sıcaklık veya ligand bağlanmasına yanıt olarak konformasyonel değişiklikleri değerlendirmek için hızlı, tahribatsız bir tekniktir.
Tam yöntemi oku
Bu bölümü okumak için ücretsiz hesapla giriş yapın.
Yöntem haritası
İlişkili yöntemlerin komşuluğu — keşfetmek için bir düğüm seçin.
Ne zaman kullanılır
Protein ikincil yapısı içeriğini hızla değerlendirmek, termal denatürasyon veya pH kaynaklı katlanma değişikliklerini izlemek ve ligand bağlanması üzerine konformasyonel değişiklikleri tespit etmek için DD spektroskopisini kullanın. DD, numune sınırlı çalışmalar ve yüksek verimli tarama için idealdir. Numunenin ölçüm dalga boyu aralığında çözünür, topaklanmamış ve optik olarak berrak olduğunu varsayar. Proteinler > 5 kDa ve nükleik asitler > 20 baz çifti için en iyi sonucu verir.
Güçlü yönler & sınırlılıklar
- Hızlı ve tahribatsız; saniyeler ila dakikalar içinde spektrumlar elde edilir
- Mikrogram protein gerektirir; izotopik etiketleme veya kristalleştirme gerekmez
- Kapsamlı yorumlama olmadan ikincil yapıyı doğrudan inceler
- Katlanma veya bağlanma geçişlerinin gerçek zamanlı kinetiklerini izlemek için mükemmeldir
- Tersiyer yapı ayrıntılarına düşük hassasiyet; bireysel kalıntıları veya yan zincir etkileşimlerini çözemez
- Uzak-UV ölçümleri (200 nm altı) gazı alınmış numuneler ve özel hücreler gerektirir; atmosferik absorbans dalga boyu aralığını sınırlar
- Farklı ikincil yapılar arasındaki spektral örtüşme nicel doğruluğu sınırlar; en iyi tahminler ±%5 hata payına sahiptir
- Numunedeki diğer bileşenlerin topaklanması, saçılması veya ışık emilimi sinyali bozar
SSS
Protein DD spektroskopisinde hangi dalga boyları kullanılır?
Uzak-UV DD (190-240 nm) peptit bağı kromofor geçişlerini tespit eder ve ikincil yapıya en duyarlıdır. Yakın-UV DD (250-350 nm) aromatik yan zincirleri (triptofan, tirozin) inceler ve tersiyer yapı ve hidrofobik çevre hakkında bilgi sağlar.
DD'den ikincil yapı tahmini ne kadar doğrudur?
Ana ikincil yapılar (heliks, tabaka) için tipik doğruluk ±%5'tir. Doğruluk, iyi spektral kalite, uygun ayrıştırma algoritması ve yüksek kaliteli referans veri kümeleri ile iyileşir. Küçük yapılar (dönüşler, sarmallar) daha az doğru tahmin edilir.
DD protein-protein etkileşimlerini tespit edebilir mi?
Dolaylı olarak, evet. Bir ligand veya bağlayıcı ortak proteinin konformasyonel değişikliğine neden olursa, DD ikincil yapıdaki kaymayı tespit edecektir. Ancak, ikincil yapıyı bozmayan zayıf etkileşimler tespit edilemeyebilir; yüzey plazmon rezonansı veya izotermal titrasyon kalorimetrisi, bağlanma afinitesi belirlemesi için daha iyidir.
Kaynaklar
- Greenfield, N. J., & Fasman, G. D. (1969). Computed circular dichroism spectra for protein secondary structures. Biochemistry, 8(10), 4108-4116. DOI: 10.1021/bi00838a031 ↗
- Yang, J. T., Wu, C. S., & Martinez, H. M. (1986). Calculation of protein conformation from circular dichroism. Methods in Enzymology, 130, 208-269. DOI: 10.1016/0076-6879(86)30013-2 ↗
Bu sayfayı kaynak gösterin
ScholarGate. (2026, June 3). Circular Dichroism Spectroscopy. ScholarGate. https://scholargate.app/tr/spectroscopy/circular-dichroism
Hangi yöntem?
Bu yöntemi en yakın akrabalarının yanına koyup yan yana okuyun — kütüphane kitapları masaya serer; seçim sizindir.
- MALDI-TOFSpektroskopi↔ karşılaştır
- KSA (Küçük Açılı X-ışını Saçılımı)Spektroskopi↔ karşılaştır
- Yüzey Plazmon RezonansıSpektroskopi↔ karşılaştır