Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi
Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), yüksek basınç altında paketlenmiş bir kolonda bitki özütü bileşenlerini ayırmaktadır. Bu yöntem, hem karakteristik parmak izi profillerine hem de işaretleyici bileşiklerin doğru nicel tayinine olanak tanıyan dedektörlerle donatılmıştır. Bitkisel materyallerin kantitatif standardizasyonu için başlıca enstrümantal yöntem olup, modern farmakognozik kalite kontrolünde merkezi bir araç olarak kullanılmaktadır.
Tanım
Yüksek performanslı sıvı kromatografisi, sıvı bir mobil fazın numune bileşenlerini yüksek basınç altında paketlenmiş bir sabit fazdan geçirdiği bir kolon ayırma tekniğidir. Bu teknik, bileşenleri tespit için ayırarak, tutunma ve desen yoluyla tanımlanmalarına ve referans standartlara göre nicel olarak belirlenmelerine olanak sağlamaktadır.
Kapsam
Bu madde, kolon sıvı kromatografisi prensibini, HPLC'nin parmak izi analizi ve ham ilaçlar ile özütlerdeki işaretleyici bileşenlerin kantitatif tayini için kullanımını ve kromatografik kalite kontrol yöntemleri arasındaki yerini kapsamaktadır. Bu bir metodolojik referans olup, klinik bir rehberlik niteliği taşımamaktadır.
Temel sorular
- Bir numunenin HPLC profili, beyan edilen materyal için referans parmak iziyle eşleşmekte midir?
- İşaretleyici veya aktif bileşenlerin nicel içeriği, spesifikasyona göre ne kadardır?
- Kromatogram, tağşişi (adulteration), ikameyi (substitution) veya limit dışı bileşenleri ortaya koymakta mıdır?
Anahtar kavramlar
- Yüksek basınç altında kolon sıvı kromatografisi
- Sabit ve mobil fazlar; ters faz ayırımı
- Tutunma süresi ve çözünürlük
- Dedektörler (UV/DAD, MS, ELSD)
- Referans standartlara karşı kantitatif tayin
- HPLC parmak izi analizi ve işaretleyici bileşikler
- Parmak izlerinin kemometrik analizi
Mekanizmalar
Bir pompa, çözünmüş numuneyi taşıyan sıvı mobil fazı, ince sabit faz partikülleriyle dolu bir kolondan geçirmektedir; bileşenler, fazlar arasındaki farklı dağılımlarına göre ayrılmakta ve karakteristik tutunma sürelerinde elüe olmaktadır. Ultraviyole veya diyot dizili (diode-array), kütle spektrometrik veya buharlaştırmalı ışık saçılımı (evaporative light-scattering) gibi dedektörler, elüe olan pikleri kaydederek hem bir parmak izi profili hem de referans standartlara karşı kalibrasyon yoluyla işaretleyici bileşenlerin kantitatif içeriğini üretmektedir. Kalitatif parmak izinin kantitatif tayin ile birleştirilmesi—ki bu genellikle kemometrik tekniklerle yorumlanmaktadır—bitkisel materyallerin kimlik, tutarlılık ve içerik kontrolü için güçlü bir temel sağlamaktadır (xie-2006, liang-2010, who-2011-qc).
Klinik önem
HPLC, bitkisel materyallerdeki kimlik doğrulamayı ve işaretleyici veya aktif bileşenlerin doğru ölçümünü desteklemektedir; bu da parti tutarlılığı ve kalitesinin belgelenmesi için merkezi bir öneme sahiptir. Bu madde analitik bir yöntemi tanımlamakta olup, bireysel tedavi kararları için bir temel oluşturmamaktadır.
Kanıt ve kılavuzlar
DSÖ (WHO) kalite kontrol kılavuzları ve farmakope monografları, bitkisel materyallerin kimlik ve kantitatif tayini için HPLC'yi kullanmaktadır. Kromatografik parmak izi analizine ilişkin derlemeler, genellikle kemometrik yöntemlerle birlikte HPLC'yi bitkisel kalite değerlendirmesinde önde gelen bir yaklaşım olarak belirlemektedir (who-2011-qc, xie-2006, liang-2010, evans-2009).
Tarihçe
Yüksek performanslı sıvı kromatografisi, yirminci yüzyılın sonlarında klasik kolon kromatografisinden gelişmiş ve farmasötik analizde baskın kantitatif ayırma yöntemi haline gelmiştir. Parmak izi analizi ve işaretleyici nicel tayinine uygulanması, onu bitkisel ilaç standardizasyonunun temel taşlarından biri haline getirmiş, giderek kütle spektrometrisi ve kemometrik veri analizi ile birleştirilmektedir (xie-2006, liang-2010, evans-2009).
İlgili konular
Temel eserler
- xie-2006
- liang-2010
Sıkça sorulan sorular
- HPLC neden kantitatif standardizasyon için tercih edilmektedir?
- Hassas dedektörlerle bileşenleri bir kolonda ayırması ve referans standartlara göre kalibre edilebilmesi nedeniyle, işaretleyici veya aktif bileşiklerin içeriğini doğru bir şekilde ölçmektedir; bu durum daha basit kalitatif yöntemlerle mümkün olmamaktadır.
- HPLC parmak izi nedir?
- Bir özüt tarafından belirli tutunma sürelerinde üretilen karakteristik pik desenidir; bu profilin bir referansla karşılaştırılması kimlik ve tutarlılığın doğrulanmasına yardımcı olmakta ve kemometrik tekniklerle analiz edilebilmektedir.